3快繁瓶装苗的控制
在快繁脱毒苗时,瓶中如少放脱毒苗,其长得快,脱毒苗节间长、叶大且须根发达;如放多脱毒苗,其长得慢,脱毒苗弱、叶小且挨瓶的苗腐烂。这2种情况对快繁都不利,故快繁苗时,在瓶中放40~50根脱毒苗为宜;同时快繁脱毒苗应控制苗的节间。
4瓶苗污染的控制
在脱毒瓶苗的继代培养过程中,常因种种原因出现细菌类和真菌类污染,细菌污染苗极弱,且扩繁后下一代大部分表现为细菌污染,在生产中通常用抗生素来处理细菌污染。对于真菌污染的脱毒瓶苗,除严格操作规程外,可在培养基中配制不同浓度多菌灵来减轻瓶苗污染率。最主要是快繁留的基础脱毒苗没有细菌和真菌的污染。而对于继代扩繁4年以上的瓶苗,要定期进行病毒检测确认是无病毒苗。因此,要定期更新脱毒瓶苗,每年应通过剥离茎尖组织的办法培养新鲜无病毒瓶苗,以确保继代培养脱毒瓶苗质量。
5无菌操作室内消毒灭菌
5.1操作前消毒
一是无菌室刚开始工作或间隔1~2个月未进行消毒时,先把高锰酸钾倒入培养皿,再倒入甲醛,关闭门窗进行熏蒸消毒,间隔1~2d即可在室内工作;二是将工作服、口罩、拖鞋、盛装75%的酒精瓶、剪刀、镊子、苗源瓶、快繁瓶等无菌室所需物品放在无菌室固定位置,启动超净工作台,通风杀菌,并将室内紫外灯打开消毒,工作人员快速离开无菌室,灭菌25~30min即可。
5.2操作中消毒
工作人员进入隔离间,穿戴好消毒服装,在组培室用75%的酒精将双手消毒,再用酒精泡的酒精棉擦超净工作台,同时将镊子、剪刀和支撑干用酒精擦过后,放在加热器进行5~6s的消毒,并将已挑拣好的无污染的脱毒苗放在超净工作台上,先打开灭菌过的快繁瓶放在超净工作台上,然后拧开脱毒苗瓶的口,用已灭菌过的镊子将脱毒苗瓶中的小苗夹出瓶口,只留根部在瓶内,用剪刀剪掉根部,然后再用镊子夹小苗离快繁瓶口1~2cm(注意不要让小苗挨上快繁瓶瓶口,以防感染),剪带1片小叶茎放在快繁瓶中。盖上盖子,在苗瓶外壁用打号枪注明该品种的编号及快繁日期。
6定期检查
放在生长间的快繁脱毒苗,一般每隔7d要用稀释好的清洁尔灭喷撒灭菌,每天早关灯和晚开灯时,发现有污染的瓶苗,必须马上将其拿出生长间,信捷职称论文写作发表网,并放入高压灭菌锅灭菌,然后用清洁热水加入适量洗衣粉,用刷子涮洗苗瓶,并换水冲洗,然后倒置木架上晾干水珠待用。健康苗20多天就可快繁或移栽温室。
7取苗
在取苗时,有时也有真菌污染的脱毒苗,不能作快繁苗但可以作移栽苗。如果下一批苗要得急,取苗的同时需做培养基,若在同一间进行,带有真菌的脱毒苗被取出时,就会污染正在做的培养基,故应分开进行。