1.2.5 同时将显色培养基上分离培养的念珠菌稀释成2麦氏浊度的菌悬液，按照API 20C AUX的说明书进行操作，30℃孵育48～72h读取结果，用ATBCIRS软件自动处理编码得出念珠菌菌名。
2 结果
2.1 显色培养基的分离效果
沙保罗琼脂培养基及本实验室研制的显色培养基分离效果如表2所示。在沙保罗琼脂培养基中生长，而在本实验室显色培养基受抑制的20株菌株经过革兰氏染色后发现均为革兰氏阴性菌杆菌，选用API 20 E对其进行鉴定，结果如表3所示，这些菌株均为肠杆菌科的细菌，而非念珠菌，在沙保罗琼脂培养基上表现为假阳性，而在本实验室研制的显色培养基上得到了很好的抑制。表明显色培养基的选择性明显优于沙保罗琼脂培养基。
表2 两种培养基分离效果比较
Table 2 the separation of two media

表3       20株菌的API鉴定结果
2.2 显色培养基的特异性及符合率试验
本实验室研制的显色培养基和科玛嘉显色培养基在初步鉴别念珠菌种上的效果相同，37株菌与API鉴定的总符合率能达到94.6%。经显色培养基初步鉴别为白色念珠菌的21株菌，除1株被API鉴定为葡萄牙念珠菌外，其余20株均被鉴定为白色念珠菌，符合率为95.2%；经显色培养基初步鉴别为为光滑念珠菌的8株菌，除1株被API鉴定为挪威念珠菌外，其余7株均被鉴定为光滑念珠菌，符合率为87.5%；而热带念珠菌和克柔氏念珠菌在显色培养基上初步鉴别的结果与API鉴定符合率均达到100%。表明显色培养基对念珠菌各种的初步鉴别的特异性很高。
表4 三种方法结果比较
Table 4 The Results of three methods
3 讨论
对念珠菌建立起鉴别性显色快速检测技术, 实现对致病菌的快速检测, 可以大大地降低工作量、节省人力和物力, 因而在临床疾病诊断中对提高检测样本效率具有十分重要的意义。目前, 国内外已有不少应用显色培养基进行致病菌分离的文献报导 [2-4]。
临床上最常见的4种念珠菌白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌和克柔氏念珠菌占念珠菌总数的95.3%[5], 而深部真菌感染中念珠菌的比例高达87.5%～94.5%[6-7]。本实验室研制的显色培养基鉴定的37 株念珠菌中白色念珠菌占20 株（54.1%）,在念珠菌中所占比例最高，与国内相关报道相似[8]。热带念珠菌6株（16.2%）、 光滑念珠菌7 株（18.9%）、克柔念珠菌2 株（5.4%）。四种念珠菌占鉴定总株数的94.6%。
已有文献指出，沙保罗培养基用于念珠菌菌检测容易造成漏检或误检[9]。本次研究发现有20株在念珠菌显色培养基受抑制的菌株在沙保罗琼脂培养基上有生长，中国职称论文发表写作网，经过API鉴定都为肠杆菌科的菌株。沙保罗琼脂培养基容易受到肠杆菌科的杂菌干扰造成假阳性的现象与黄晓燕等[10]的研究结果相符。从比较的结果可以看出，念珠菌显色培养基的选择性明显优于沙保罗琼脂培养基。
念珠菌生长较慢，传统的鉴定方法比较繁琐，需时较长且准确率不高，而采用API鉴定条等自动或半自动方法虽能将菌鉴定到种，但价格比较昂贵，不适合中小型医院及检验机构的大量使用。而本实验室研制的念珠菌显色培养基中含有多种酶底物，可分别与白色念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、克柔氏念珠菌的不同酶类作用，从而呈现不同的颜色反应，达到在分离菌株的同时还可以对以上4种菌进行初步鉴别。与科玛嘉念珠菌显色培养基的比对显示两者的效果相当，均优于沙保罗琼脂培养基（不能区分念珠菌的各个种）。另外，显色培养基对念珠菌的初步鉴别需时约48h，而传统分离鉴定方法需要3～5天出报告，因而显色培养法能及时给临床治疗提供依据，对由念珠菌感染引起的疾病治疗具有重要意义，同时显色培养法鉴别符合率高，大幅度减少后续鉴定工作，而且该培养基制备简单，使用方便，价格相对便宜，适合在基层单位推广。
参考文献
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