4、ECM中LN、Col Ⅳ含量的放射免疫法(RIA)测定采用竞争法，将缓冲液稀释10倍，分别将125 I－LN、抗LN血清、125 I－ColⅣ、抗ColⅣ血清及二抗用缓冲液稀释，将待测上清分别与125 I－LN、125 I－ColⅣ及相应的抗血清混匀，4℃过夜反应，加二抗4℃反应60min，离心3500r/min 10min弃上清，125 I放射免疫测量仪计数。

　　5、统计学处理数据均采用SDAS软件进行统计处理，结果用(±s)表示。

　　三、研究的结果

　　肾康注射液与苯那普利对ECM成分含量的影响，在对ECM中FN含量影响方面，肾康注射液组(Ⅲ～Ⅶ组)与空白对照组(Ⅰ组)相比，均有显著性差异(P＜0.05～0.01)；说明肾康注射液除低浓度组2(Ⅷ组)外，其余各组对FN均有明显的抑制作用，而且随着浓度的递增此作用更加明显，并表现出一定的量效关系。实验还发现肾康注射液即使在极小浓度时对ECM中LN及Col Ⅳ的含量也有明显的抑制作用，该抑制作用也呈现出一定的量效关系。苯那普利组(Ⅱ组)在对FN、Col Ⅳ含量影响方面，与空白对照组相比也有显著性差异(P＜0.01～0.05)；但对LN影响方面，两者比较无显著性差异(P＞0.05)；说明苯那普利对ECM中FN、Col Ⅳ也有一定的抑制作用，但对LN其抑制作用不明显。另外，从表中还可看出，肾康注射液各浓度组(Ⅲ～Ⅷ组)与苯那普利组相比，在抑制LN方面也均有极显著性差异(P＜0.01)；除肾康注射液低浓度组2(Ⅷ组)外，其余各组与苯那普利组相比，在抑制Col Ⅳ方面也有显著性差异(P＜0.01～0.05)；肾康注射液高浓度组(Ⅲ组)与苯那普利组相比，在抑制FN方面也有显著性差异(P＜0.05)；说明肾康注射液在抑制ECM中FN、LN、Col Ⅳ含量方面优于苯那普利。

　　四、讨论

　　肾小球硬化时ECM的改变是近年来国内外肾脏病学者研究的热点之一，ECM在肾小球内的蓄积，是肾小球硬化的主要特征性变化。

　　苯那普利是第四代血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)。现已证实，肾脏具有独立的肾素－血管紧张素系统(RAS)，血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)是该系统最具有生物活性的因子。目前研究证实AngⅡ受体(ATR)至少有Ⅰ和Ⅱ两种亚型，其中Ⅰ型受体(ATR1)意义最大。该受体分布在肾小球MC上，与AngⅡ、AngⅢ有高度的亲和力。进一步的研究还发现ATR1占肾内ATR亚型分布的90%以上，Osborne等在10余年前就报道动脉内注射3H标记的AngⅡ，发现3H-Ang Ⅱ只结合在肾小球系膜区，而不与肾血管、肾小管等部位结合。用125 I-AngⅡ进一步实验发现光镜下125 I-AngⅡ位于肾小球上，电镜下125 I-AngⅡ颗粒在MC浆中。血管紧张素转化酶是RAS中最后一级酶促反应的关键酶，用ACEI能够抑制AngⅡ的形成，可使循环和组织中的AngⅡ水平下降，且可直接降低肾内AngⅡ的生成量，从而对抗AngⅡ对肾脏的不良反应，减轻肾小球硬化的发生。大量的研究还证实，ACEI除减轻肾小球的高灌注和高滤过作用外，还可通过阻断肾小球基底膜(GBM)上AngⅡ的特异作用的结合点，可使GBM固有的负电荷增多，并抑制GBM的进一步增厚，从而直接改善GBM的通透性。目前体内外动物实验还证实，ACEI亦有抑制肾小球MC和系膜基质增生的作用，从而直接阻止肾小球硬化的形成。近年来，临床上已成功地将ACEI用于各类肾脏病的治疗，发现在降低蛋白尿，阻止肾小球硬化方面具有一定的作用。

　　本实验结果表明，肾康注射液对ECM中FN、LN、Col Ⅳ的含量具有明显的降低作用，并呈现出一定的量效关系。苯那普利虽对FN、Col Ⅳ也有一定的抑制作用，但此抑制作用远不及肾康注射液明显。从而提示MC是肾康注射液发挥治疗作用的重要靶细胞，减轻ECM的积聚可能是肾康注射液延缓肾小球硬化的重要作用机制之一。值得注意的是，苯那普利主要是通过抑制AngⅡ的形成，减轻其对肾脏的损害，从而在阻止肾小球硬化方面发挥着重要作用，而肾康注射液是否对AngⅡ的形成也有一定的抑制作用，值得进一步深入探讨。