论前S1抗原检测体会(2)
作者:佚名; 更新时间:2014-12-12
加查前S1抗原,弥补了因HBeAg缺失造成的诊断和治疗困难;四是在HBV无症状携带者中,有一定比例的HBeAb(+)者,加查前S1抗原(+)提示病毒在体内还较活跃,病毒并没有清除,肝脏还有潜在的病理损伤的可能;五是抗病毒治疗乙型肝炎,加查前S1抗原可作为治疗前的患者筛查和治疗后的疗效判断,尤其对HBeAb(+)的慢性肝炎患者抗病毒治疗的排查也起到重要作用。因此检验两对半,加查前S1抗原可在急性肝炎、慢性肝炎、HBV无症状携带者和抗病毒治疗乙型肝炎诊疗过程中起到十分重要的作用;②HbeAb(+)的HBV感染者中,为何要检查前S1抗原?慢性乙型肝炎患者,抗HBe阳转后,部分可演变为肝硬化或肝癌,自然好转率非常低;HBeAb(+)的HBV无症状携带者,往往是因为病毒基因变异所致,其所携带的HBV变异毒株大多数表现为在病毒基因组前C区末端突变,产生一个新的终止密码子(TAG),阻断了HBeAg的形成,导致在临床上出现HBeAg缺陷和HBV血清型。因HBeAg的缺失,造成诊断和治疗的困难,此时检测前S1抗原既能较为准确的检测病毒在机体内复制状况,又能诊断疾病的转归和了解是否携带HBV变异毒株,充分显示了前S1抗原的临床价值;③为什么检测HBV-DNA还要检测前S1抗原?一是前S1蛋白是乙型肝炎病毒(HBV)外膜蛋白的主要专长部分,在病毒感染机体的整个周期中,前S1蛋白的独特功能,使其能够较充分的反应机体的体液免疫状况,直至病程的转归过程,这是单一测定HBV-DNA所不能做到的;二是免疫测定技术因其有效、直接、简便的特点,已经在临床诊断应用上占主导地位。前S1抗原的检测与基因测定HBV-DNA在治疗方面能够相互补充和加强;三是HBV DNA-PCR技术要求精密、所需要的条件高,易发生污染和假阳性,不适于做常规检测,前S1抗原测定与之相互补充和加强。
  
  4 检测与操作
  乙型肝炎病毒前S1抗原酶免诊断试剂盒采用ELISA双抗体夹心法,测定前S1抗原肽,最低检测浓度为0.1ug/L。检测原理采用双抗体夹心ELISA法,用抗-PreS1和抗HBs作为固相化抗体和酶标抗体。如果标本中存在乙肝病毒PreS1抗原,则形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,加入TMB底物产生显色反应,反之则无显色反应,适用于血浆和血清类标本。试剂盒组成:微孔板、阴性对照、阳性对照、酶结合物、显色液A、显色液B、终止液、洗涤液。
  操作步骤第一步,反应孔内加入待测标本50uL,设阴、阳性对照各2孔,每孔加入阴、阳性对照各50uL,并设空白对照1孔,置37℃孵育30min;第二步洗板;第三步每孔加入酶结合物1滴或50uL(空白对照孔除外),置37℃孵育30min;第四步洗板,第五步加入显色液A、B各一滴,充分混匀后,置37℃孵育15min;第六步加入终止液、混匀;第七步酶标仪读数。
  
  5 判断及需要注意的问题
  5.1 判断标准
  (1)所有阴性对照、阳性对照和标本的读数值减去空白对照读数即为计算值;
  (2)阳性对照读数必须比阴性对照读数大0.300,实验结果成立;
  (3)临界值(CUTOFF)=2.1,阴性对照平均OD值。测试标本的计算值大于或等于临界值为阳性;测试标本的计算值小于临界值为阴性。
  5.2 注意事项
  (1)使用前试剂盒应预先在室温下平衡30min;
  (2)试剂盒启用后应尽快用完;
  (3)不同批次的试剂组份不能混用;
  (4)使用本试剂盒应视为有传染性物质;
  (5)温育反应板温度和时间必须严格控制;
  (6)阳性对照仅用于判读试剂盒内的包被微孔板和酶是否有效,信捷职称论文写作发表网,不是临界值的标志;
  (7)反应终止后,请在10min内判读结果;
  (8)封片纸不能重复使用。
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