3壳聚糖作为微生物疫苗的免疫佐剂研究

　　Kang等采用三聚磷酸盐与壳聚糖发生离子交联的方法，制备得到包裹支气管败血性博德特氏菌皮肤坏死毒素(BBD)的壳聚糖载药微球。然后将载有BBD的壳聚糖微球直接通过鼻腔给大鼠进行免疫后，采用ELISA法来检测血清、鼻流出液及唾液中BBD特异的免疫反应。结果显示，鼻腔中BBD特异的IgA抗体滴度和血清中的IgG及IgA滴度均与给药时间和给药剂量有关。说明鼻内免疫对鼻相关的淋巴样组织有靶向作用，同时也说明壳聚糖对于鼻黏膜免疫具有免疫佐剂作用。常海燕[4]等将壳聚糖和流感病毒灭活疫苗混合后经腹腔免疫BALB/c小鼠，免疫后检测血清中IgG抗体及鼻洗液中IgA抗体水平，加强免疫后1周，用致死性(40LD50)流感病毒A/PR/8/34(H1N1)攻击小鼠，发现壳聚糖作佐剂能显著增强血清抗体含量，并提高小鼠抗病毒攻击的能力。Read等则将壳聚糖和三价流感灭活疫苗一起鼻腔及肌肉免疫小鼠,发现壳聚糖可以明显提高其局部和血清抗体反应。研究结果显示壳聚糖作为流感病毒灭活疫苗的新型佐剂，可以增强疫苗的抗体反应。
　　谢勇[5]等对以壳聚糖为佐剂的幽门螺杆菌疫苗的免疫保护作用及其机制进行了深入的研究。他们将BALB/c小鼠随机分为空白对照组（PBS溶液）、壳聚糖酸溶液组、壳聚糖颗粒组、Hp抗原组、Hp抗原+壳聚糖酸溶液组、Hp抗原+壳聚糖颗粒组、Hp抗原+霍乱毒素（CT）组、Hp抗原+壳聚糖酸溶液+CT组及Hp抗原+壳聚糖颗粒+CT组，各组于第0、7、14、21天灌胃各免疫1次。结果显示以壳聚糖为佐剂的Hp疫苗的免疫保护率达60％,与以CT为佐剂的Hp疫苗的免疫保护率(58.33％)相似，同时以CT+壳聚糖为佐剂的Hp疫苗的保护率为84.62％、85.71％。含佐剂的Hp疫苗所诱导产生的Hp IgG水平显著高于对照组及无佐剂组，而以CT+壳聚糖为佐剂组所产生的抗Hp IgG水平显著高于仅以CT或壳聚糖为佐剂组。胃黏膜内sIgA及特异性抗Hp IgA水平在壳聚糖为佐剂组与以CT为佐剂组无差别，显著高于无佐剂组，而壳聚糖与CT联合应用组显著高于单以CT为佐剂组。研究结果表明以壳聚糖为佐剂的Hp疫苗对Hp感染具有免疫保护作用，并可成功诱导黏膜局部的特异性体液免疫应答，这可能在其免疫防御中起作用；而且可促进Thl和Th2的混合免疫反应，逆转Hp感染所致Th2反应的抑制、使Thl和Th2反应达到平衡，从而发挥其免疫保护作用。
　　Ahire 等对壳聚糖包裹的破伤风毒素（tetanus toxoid，TT）疫苗诱导的全身和局部免疫应答进行了研究。小鼠随机分为壳聚糖+TT抗原组（Chitosan encapsulated tetanus toxoid ，CS-TT）、TT抗原组、壳聚糖组，三组均经口服途径免疫小鼠。ELISA法检测血清中抗破伤风毒素IgG，检测洗肠液及粪便中抗破伤风毒素IgA。观察到CS-TT组小鼠的免疫反应有剂量依赖性，全身和局部免疫有很大程度的提高，表明壳聚糖微粒悬液包裹了高分子量的破伤风毒素，诱导了肠的IgA分泌和体循环的IgG的产生。David等将壳聚糖抗原蛋白溶液皮下免疫小鼠，结果显示小鼠特异性抗体滴度增加5倍，脾CD4+ T细胞增值增加6倍。强的抗体滴度增长和迟发型超敏反应（DTH）揭示壳聚糖诱导了体液免疫和细胞免疫。可能的机制为：粘稠的壳聚糖溶液增加了抗原的滞留时间，免疫7天后，大于60%的抗原蛋白仍保留在注射部位；壳聚糖诱导了67%引流淋巴结细胞的瞬时膨胀，膨胀的高峰期持续在壳聚糖免疫后14-21天，之后以多糖的方式降解。

　　结语

　　综上所述，壳聚糖作为免疫佐剂，通过皮肤、口服、鼻腔、皮下等不同的免疫途径，在多种疫苗研究中发挥重要作用，可有效的诱导局部黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫反应。壳聚糖及其衍生物良好的生物黏附性，促进吸收作用及免疫调节作用使其在疫苗黏膜给药系统中的应用有着其他载体材料不可比拟的优势。以壳聚糖为佐剂的生物黏附给药系统可显著提高药物在各黏膜表面的滞留时间，从而提高生物利用度。随着研究的不断深入，壳聚糖作为免疫佐剂必将发挥更重要的作用。
　　
　　参考文献
　　[1] 蒋挺大.壳聚糖〔第二版)[M].北京:化学工业出版社，2006.1-35.
　　[2] 王焱冰，李轶杰，潘鑫艳，等.壳聚糖介导增强DNA疫苗皮肤免疫效果的研究[J]. 生物技术，2006，16（2）：68-71.
　　[3] 胡云章，李菁，刘国栋，等. HBV壳聚糖微球疫苗鼻腔免疫的初步研究[J].
　　中国生物制品学杂志，2005，18（2）：143-145.
　　[4] 常海燕，陈建军，方芳，等.流感病毒灭活疫苗新型佐剂-壳聚糖增强免疫
　　作用研究[J].中国生物制品学杂志，2004，17（6）：383-384.
　　[5]谢勇，龚燕锋，周南进，等. 以壳聚糖为佐剂的Hp疫苗诱导的体液免疫应答及其免疫保护效应[J].中国病理生理杂志，2007，23(3)：438-443.