作者：徐修礼 ，张建芳 ，刘宝瑞 ，于文彬，马越云 ，苏明权，刘家云
【关键词】 高聚金葡素
关键词: 高聚金葡素;肺癌;免疫治疗
0 引言
高聚金葡素（high agglomerative staphylococcin，HAS）是由沈阳协合集团开发的一种新型超抗原抗癌生物制剂，我们用HAS体外刺激淋巴细胞，并观察此淋巴细胞在体外和裸鼠体内对肺癌生长的抑制情况，获得较好的效果.
1 材料和方法
1.1 材料
HAS由沈阳协和集团馈赠;酶联免疫检测仪为Labsystem产品;抗CD14 /抗CD45 ，抗CD3 /抗CD
56 双色荧光标记抗体由本院免疫科提供.肺癌A549细胞为本校基础部免疫学教研室提供;乳腺癌MCF-7细胞引自军事医学科学院;大肠癌moser细胞、肺癌GLC-82细胞为本室保留株.裸鼠由本校实验动物中心提供，3～4周龄，体质量18～22g.
1.2 方法
常规分离外周血单个核细胞，用含100mL L-1 FCS的1640悬浮，以每孔5×106 个细胞加入6孔板，37℃，50mL L-1 CO2 环境下贴壁2h，用预热的培养液轻轻洗出非贴壁细胞，调浓度至5×109 L-1 ，加HAS2500U L-1 ，37℃，50mL L-1 CO2 条件下培养，每4d换液，即为HASL.HASL培养0和10d分别用抗CD14 /抗CD45 、抗CD3 /抗CD56 双色荧光染色后用流式细胞仪分析.以HASL为效应细胞，A549，GLC-82，moser和MCF-7为靶细胞，效靶比为10 1，每组3个复孔，置37℃，50mL L-1 CO2 孵箱中培养16h，MTT显色，测各孔490nm吸光度（A）值.杀伤率计算如下:杀伤率=（1-试验孔A-效应细胞A
靶细胞A ）×100% 荷瘤裸鼠的抑瘤实验:裸鼠股部皮下接种GLC-82细胞5×105 个，随机分为对照组和HASL治疗组.接种瘤后4，10 和15d向治疗组肿瘤局部注射0.2mL1×107 个HASL细胞，对照组注射0.2mL生理盐水.定期观察肿瘤生长状况.
2 结果
培养10d的HASL中CD3+ CD56+ 双阳性细胞占21%，信捷职称论文写作发表网，高表达CD45 ，CD14 阳性率低于10%.MTT试验表明，HASL对GLC-82，A549，moser和MCF-7具有不同程度杀伤作用，杀伤率分别为63%，48%，60%和45%.在预实验中证实，裸鼠皮下接种GLC-82细胞5×105 个后4d即可见肿瘤生长，20d肿瘤体积约可达300mm3 ，肿瘤发生率为100%.在实验中，经过3次免疫细胞治疗，至20d结束实验，测量各组肿瘤体积并杀鼠取瘤称质量，结果见表1.表1 HASL治疗对GLC-82荷瘤裸鼠的抑瘤作用（略）
3 讨论
文献证实HAS对T细胞具有强大的刺激功能，并能增强NK细胞活性［3］ .在本实验中，外周血淋巴细胞经高聚金葡素刺激后，CD3+ CD56+ 双阳性细胞占21%.该类细胞属T细胞，但表达NK细胞标志，体外杀瘤活性介于CD3+ CD56- T细胞和CD3- CD56+ NK细胞之间，其细胞毒活性不具有MHC限制性［4］ ，推测CD3+ CD 56+ 双阳性细胞为主要的杀瘤效应细胞.在裸鼠实验中，HASL治疗组裸鼠的肿瘤生长明显慢于对照组，经3次治疗后肿瘤生长抑制率达76.3%，可能是多种机制共同作用的结果.
参考文献:
［1］Lando PA，Hedlund G，Dohlsten M et al.Bacterial superanti-gens as anti-tumor agents:Induction of tumor cytotoxicity in human lympocytes by staphylococcal enterotoxin A ［J］.Cancer Immunol Immunother，1991;33（4）:231-237.
［2］Dohsten M，Lando PA，Hedlund G et al.Supeuantigen-induce cytokines suppress growth of human colon-carcinoma cells ［J］.Int J Cancer，54（3）:482-488.
［3］王蓝田.世界上第一个超抗原抗癌生物制剂 高聚金葡素的临床效果［J］.中国肿瘤临床，1998;25（5）:395-396.
［4］任 欢，邢淑贤，徐红薇.CIK细胞的体外增殖及体内外杀瘤活性的实验研究［J］.中国肿瘤生物治疗杂志，1999;6（1）:17-21.
