【摘要】 目的 观察枸杞对D-半乳糖所致衰老小鼠学习记忆的影响。方法 建立D-半乳糖致衰老小鼠模型，跳台实验检测其学习记忆能力，同时测定其大脑乙酰胆碱酯酶(AchE)活性，用黄嘌呤氧化酶法测定大脑超氧化物歧化酶(SOD)活性，硫代巴比妥法测定大脑丙二醛(MDA)含量，观察小鼠服用枸杞汁后上述指标变化。结果 与D-半乳糖模型组比较，各实验组均可提高小鼠的学习记忆能力(P＜0.05或P＜0.01)，显著增加D-半乳糖所致衰老小鼠大脑SOD活性、降低MDA含量(P＜0.05或P＜0.01)，可显著升高大脑AchE活性(P＜0.05，或P＜0.01)。结论 枸杞能改善D-半乳糖所致衰老小鼠的学习记忆功能，其机制可能与枸杞的抗氧化自由基作用有关。
【关键词】 枸杞
阿尔茨海默病(AD)是一种渐进性神经退行性疾病，其发病有增加的趋势〔1〕。枸杞(Fructus lycii)是我国传统的药材，它含有丰富的营养成分和药理活性成分。现代医学已证实，枸杞可调节免疫、延缓衰老和清除自由基等功能。本实验采用D?半乳糖所致衰老小鼠模型，研究AD小鼠学习记忆能力、脑组织乙酰胆碱酯酶(AchE)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量的变化及枸杞对这些指标的影响，并分析其作用机制，为临床应用提供理论依据。
1 材料与方法
1?1 试验动物及分组 昆明小鼠雄性75只，体重(24g±2)g(包头医学院动物室)。随机分为5组，每组15只，即对照组，D-半乳糖模型组，信捷职称论文写作发表网，低、中、高3个枸杞汁剂量组。饲养过程中对照组和模型组各死亡3只，枸杞汁剂量组各死亡2只。
1?2 药物与仪器 枸杞(包头市奇力康医药公司)。D-半乳糖(上海源聚生物科技有限公司，批号030406)。AchE试剂盒、SOD试剂盒、MDA试剂盒(南京建成生物工程研究所)。752C紫外-可见分光光度计、721型分光光度计(上海第三分析仪器厂)。STT-2型跳台仪(中国医科院药研所)；德国来卡2135型切片机、加样器(上海伟业有限公司)。离心机(北京医用离心机厂)；混匀器(上海伟业有限公司)。
1?3 D-半乳糖模型及给药方法 除对照组给予生理盐水外，其他组每日均腹腔注射0?12g/(kg?bw)的D?半乳糖，给药体积10ml/(kg?bw)。枸杞组同时灌胃给予高剂量(1?5g/ml)、中剂量(0?75g/ml)、低剂量(0?375g/ml)，对照组和模型组灌胃给予等容积的生理盐水，连续6周。枸杞汁制备：以枸杞子总体积的5倍量自来水冷浸3h，微沸1h×2次，合并滤液，文火浓缩制成，无菌条件下装瓶，置4℃冰箱备用。
1?4 方法
1?4?1 跳台实验 造模后灌胃至4周后1h开始跳台实验［2］。
1?4?2 AchE、SOD、MDA的测定 小鼠脑组织AchE活性用试剂盒方法；SOD活力采用黄嘌呤氧化酶法；MDA含量采用(TBA)法；脑组织蛋白质定量采用考马斯亮蓝(CBB-SDS)法。
1?5 统计分析 采用SPSS10?0软件进行t检验。
2 结果
2?1 枸杞对小鼠跳台成绩的影响(表1) D?半乳糖所致模型组，无论学习成绩和记忆成绩，与对照组比较，模型组小鼠的错误次数明显增多(P＜0?01)，学习成绩的反应期明显延长(P＜0?01)，记忆成绩的潜伏期明显缩短(P＜0?01)；与模型组比较各给药组小鼠学习记忆障碍有明显的改善(P＜0?05或P＜0?01)；各用药组间比较以枸杞汁中剂量作用最为明显，但枸杞汁低、中、高剂量组间差异无统计学意义(P＞0?05)。
2?2 枸杞对小鼠大脑AchE、SOD、MDA各项指标的影响(表2)对实验组D?半乳糖致小鼠脑组织AchE活性测定结果表明，模型组小鼠大脑中AchE减少，与对照组比较，差异有统计学意义(P＜0?01)，表明D?半乳糖所致模型组，可以损伤胆碱能神经元，引起小鼠学习记忆障碍。与模型组比较，各给药组可显著升高D?半乳糖所致的AchE活性下降(P＜0?05或P＜0?01)并基本达到对照组水平；模型组小鼠大脑中SOD活力明显降低，MDA含量明显增多，给予枸杞汁后可明显提高SOD活性、降低MDA含量。
表1 枸杞对小鼠学习记忆的影响（略）
注：与对照组比较，a P＜0?01；与模型组比较，b P＜0?05,c P＜0?01
表2 枸杞对小鼠脑组织AchE、SOD、MDA的影响（略）
注：与对照组比较,a P＜0?01；与模型组比较,b P＜0?05,c P＜0?01
3 讨论
胆碱能系统是正常认知功能中最为重要的神经递质系统，引起AD的生理生化机制目前还不清楚，与衰老致痴呆相关的因素很多〔3〕，AchE的异常可能是引起AD的一个重要因素。D?半乳糖致小鼠脑组织AchE活性明显下降〔4〕，单胺氧化酶活性明显升高。AD患者大脑皮层内胆碱乙酰基转移酶、AchE活性均下降〔5，6〕。已知胆碱能系统与学习记忆关系密切，Ach为促学习记忆的神经递质，而AchE是降解Ach的酶，AchE活性降低，间接说明胆碱能功能衰退，故D-半乳糖致小鼠脑组织AchE活性下降，提示其中中枢胆碱能功能发生障碍，从而使学习记忆能力下降。本研究结果支持此结论。本研究结果显示，枸杞能减轻由D?半乳糖对小鼠脑的脂质过氧化损伤，枸杞可以明显提高小鼠脑SOD活力，降低MDA含量。其作用机制可能是，机体自由基防御体系包括酶促体系和非酶促体系，酶促体系如SOD，可有效清除机体自由基；非酶体系是具有抗氧化活性的物质，如维生素E、维生素C、黄酮类、β-胡萝卜素等。枸杞子每百克含维生素E26?46mg，维生素C 21?4mg，β-胡萝卜素19?6mg，黄酮类物质500mg，复合枸杞多糖 72?1mg〔7〕。研究结果表明，枸杞能增强D-半乳糖致衰老小鼠的学习记忆功能，可能与枸杞具有调节中枢胆碱能神经系统和抗脂质过氧化作用有关。
【参考文献】
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