乙型肝炎病毒截短C基因与前S1基因在大肠杆菌中的融合表达及纯化(2)
作者:佚名; 更新时间:2014-12-13
的控制和痊愈过程中起核心作用[2-3]. 多个CTL表位的疫苗研究策略是近年各类HBV新型疫苗研究的热点. HBV核心C基因在不同亚型间最为保守, 在它编码的180多个氨基酸中,CTL表位多位于第150位氨基酸(amino acid, AA)以前,其中18~27位AA为HLAA0201所限制,第88~96位AA被HLAA11所限制,第141~150位AA为HLAAw68和HLAA31分子所限制,此外第75~81位AA或72~88位AA是很强的构像型B细胞表位,因此核心抗原是比较理想的疫苗研究靶分子[4-5]. 在既往HBV疫苗研究中人们大多选用S基因编码的蛋白,并辅以CpG, IL2等分子佐剂试图达到免疫目的,但效果并不理想[6-7]. 而preS1基因编码蛋白含有HBV和肝细胞膜结合的位点,并且相当保守, 肝细胞、B细胞和T细胞均可表达针对其第21~47位AA的受体,故前S1抗体是除表面抗体外又一重要的中和抗体[8]. 因此HBV的C基因和preS1基因已经成为近年来HBV新型疫苗研究的重点[9].

  几乎所有新型HBV疫苗如亚单位疫苗、DNA疫苗、分枝肽合成疫苗、新载体疫苗或植物转基因疫苗的前期研究工作中都需要候选分子高效表达,以便在体外评价疫苗候选分子刺激细胞增殖的潜力和CTL杀伤效应,达到全面评价候选分子的目的[10-12]. 而HBV各个基因片段原核表达难易程度不同,考虑到C基因原核表达难度低,本研究采用将截短C基因置于preS1基因前面的方式,构建了原核重组表达质粒并获得了高效表达. 目的蛋白纯化以后,Western blot进一步证实该浓缩蛋白可以与抗HBcAg、抗preS1阳性患者血清结合,信捷职称论文写作发表网,具有很好的抗原性和特异性,可用于进一步的HBV新型疫苗研究;与Chen等[9]采用经典的preS1基因在前、C基因在后的表达方式所获取的同类蛋白相比,本研究中蛋白表达量明显较高. 在后续工作中,我们将选用新型的疫苗载体BCG运载候选疫苗分子,进一步研究该蛋白在CTL免疫和体液免疫中的作用.

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