作者：张卫泽 李星辉 陈永清 马凌 张明旭 乔燕
【摘要】 目的：检测载脂蛋白E（Apo E）基因多态性并探讨其与高海拔区藏、汉、回族人群血脂水平之间的关系. 方法：藏族人120例，汉族人131例，回族人100例；采集静脉血，检测三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL?c）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL?c）等，提取DNA，以聚合酶链反应?限制性片段长度多态性方法(PCR?RFLP)进行DNA多态性分析，电泳判断基因型. 结果：三民族携带E4等位基因者与携带E2, E3者相比具有TG, TC, LDL?c逐渐增高的趋势，藏族人尤为明显（P<0.01). 结论：高海拔区藏、汉、回族人群中，Apo E基因E4等位基因与高血脂相关.
【关键词】 载脂蛋白E 基因多态性 血脂 藏 汉 回族
0引言
载脂蛋白E（apolipoprotein E, Apo E）是血浆脂蛋白的一个重要组成部分，是一种多态性蛋白. 流行病学资料表明Apo E基因多态性对血脂浓度有十分明显的影响［1］. 我们对高海拔区藏、汉、回三民族Apo E基因多态性进行了观察研究，旨在探讨Apo E基因多态性与这些人群血脂水平的关系.
1对象和方法
1.1对象2005?10/2006?04甘肃省甘南藏族自治州人民医院与藏医院门诊体检者351人，其中藏族人120（男73，女47）例，年龄(47.8±9.3)岁；汉族人131（男74，女57）例，年龄（48.1±11.2）岁；回族人100（男63，女37）例，年龄（44.3±10.5）岁. 以上样本之间无血缘关系，为世居高原地区相对隔离的遗传人群. 并进行有关检查排除了肝肾功能疾患、糖尿病等疾病.
1.2方法常规酚?氯仿法提取DNA，聚合酶链反应?限制性片段长度多态性（PCR?RFLP）方法进行DNA多态性分析. 设计引物，上游(P1) 5′?AACAACTGACCCCGGTGGCG 3′，下游(P2) 5′?ATGGCGCTGAGGCCGCGCTC 3′；进行PCR. 扩增产物用Hha I 酶切；将酶切产物聚丙烯酰胺凝胶电泳，银染色，基因型判读. 检测到E2/2, E2/4, E3/3, E3/4, E4/4五种基因型，电泳分离显示：E2/2为91 bp，83 bp，63 bp；E2/4为91 bp，83 bp，72 bp，63 bp；E3/3为91 bp，63 bp；E3/4为91 bp，72 bp，63 bp；E4/4为72 bp，信捷职称论文写作发表网，63 bp. 所有人群采用日立7170型全自动生化仪检测清晨空腹时静脉血甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL?c）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL?c）等血液生化指标. 参照1997年全国血脂异常防治对策专题血脂测定的新参考值［2］ .
统计学处理：所有计量资料以x±s表示，计数资料以频数表示，采用SPSS 10.0统计软件进行数据分析. 组间均数比较采用方差分析及两两比较，基因频率之间的比较采用四格表χ2检验.
2结果
2.1汉、藏、回族人血脂测定值见表1.表1三民族受试者血脂测定值
2.2汉、藏、回族Apo E基因型分布本实验我们检测到E2/2，E2/4，E3/3，E3/4，E4/4五种基因型，未检测到E2/3基因型. 汉、藏、回族之间有统计学差异（P<0.01)，汉族以E3/3常见，而藏、回族以E3/4常见（表2）. 表2三民族Apo E基因型分布频率比较
2.3汉、藏、回族Apo E基因型与血脂水平的关系根据Apo E基因型将研究对象分为Apo E2携带者E2／X(E2／2+ E2／4), E3/3携带者和E4携带者E4／X (E4/4+ E3/4)三类. 发现TG值E4携带者高于E2携带者（P=0.019），藏族高于汉族（P=0.026）；TC值E4, E3携带者高于E2携带者（P=0.010，P=0.023），藏族高于汉族与回族（P=0.019，P=0.039）；LDL?c值E4, E3携带者高于E2携带者（P=0.001，P=0.004），藏族高于汉族与回族（P=0.017，P=0.026）（表3）.
3讨论
Apo E是血浆脂蛋白的组成成分之一，在脂蛋白代谢中起重要作用［3］. Apo E基因有三种主要的异构体Apo E2，Apo E3，Apo E4，人群中具有6种表型，即三种纯合子（E2/2，E3/3，E4/4）和三种杂合子（E2/3，E2/4，E4/3）. Apo E基因多态性的分子基础源于在112位和118位上半胱氨酸（Cys）和精氨酸（Arg）单个氨基酸的相互取代，E3为112位上是Cys，158位上是Arg；E2则为112位和158位上均是Cys，E4则为112位和158位上均是Arg. 这种单个氨基酸不同造成的异构体就是由Apo E基因多态性决定的［4］.表3三民族Apo E基因型与血脂水平的比较(汉=131,藏=120,回=100,mmol/L, x±s)
Apo E调节血脂代谢，不同Apo E基因型可能会影响个体的血脂水平. 众多的研究结果已普遍认同：E4等位基因与高水平血TC和LDL?c显著相关，而E2等位基因的作用恰恰相反. Apo E2人群血TC，LDL?c水平最低，Apo E4人群血清TC，LDL?c水平最高，Apo E3人群位于二者之间［5］，Apo E2的“降胆固醇作用”是Apo E4的“升胆固醇作用”的2～3倍［6］ . 在整个人群中，E2／2，E4／4，E2／4者的血浆TG明显高于E3／3者，提示E2，E4等位基因均与血浆高TG浓度有关. 但有些学者认为E4对TG无明显影响［7］. Apo E作为血浆脂蛋白的一个重要组成部分，直接参与脂蛋白的构成、转化和代谢．其对血脂代谢的调节可能与各等位基因编码的Apo E异构体与脂蛋白的受体的亲和性及其在体内的代谢不同有关［8］.
我们测定了高海拔区汉、藏、回族共351名研究对象的Apo E基因型，结果发现：汉族以E3/3常见，而藏、回族以E3/4常见，三民族TG，TC和LDL?c值E4携带者高于E2携带者，而藏族明显高于汉族和回族. 高海拔区藏族群众在饮食上多以牛羊肉、奶酪、酥油等高脂肪类食品为主，并其特殊的宗教信仰关系多禅坐诵经，加之气候寒冷，较少室外运动，因此较汉、回族有血脂更紊乱的趋势，这进一步证明了Apo E不同等位基因与血脂代谢的相关性.
总之，本研究初步从分子基因水平对高海拔区汉、藏、回族Apo E基因与血脂水平的关系进行了分析，更大样本量的研究可能会有更大意义的发现. 综上针对高海拔区藏族群众更应当加强宣传和教育,提倡合理饮食,坚持运动煅练等，并应有计划、有重点的对这些人群予以Apo E基因的检测，从而对预防、筛选及早期诊治这些人群血脂异常具有一定的意义.
【参考文献】
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