人DNA修复基因HOGG1真核表达载体的构建及序列测定(2)
作者:佚名; 更新时间:2014-12-13
和预防癌症发生上具有重要的作用,目前,国外已从各个方面蓬勃开展对于HOGG1基因的研究,而国内报道主要集中于基因的结构及多态性方面[7-9]. pCMVMyc是运用非常广泛的真核表达载体,内含标签MYC,外源基因与MYC融合表达,通过检测MYC的表达,可以间接获得外源基因的表达量[10]. 我们参考GenBank登录的HOGG1基因的蛋白序列设计引物,采用RTPCR技术从人胎肝组织中成功扩增出HOGG1全长基因,并通过设计引物时在上游与下游引物3′,5′端分别加入不同的酶切位点EcoRI和KpnI,确保目的片段单方向插入,定向克隆入pCMVMyc真核表达载体. 序列测定结果显示所得HOGG1基因片段序列与GenBank所载全长序列完全相同,且插入方向正确,重组子双酶切鉴定释放出预定长度片段,表明我们已获得全长靶基因,为DNA修复基因HOGG1的临床应用打下了良好基础,而成功构建的真核表达载体pCMVMyc/HOGG1则为生物靶向治疗药物如逆转DNA氧化损伤的微囊化基因工程细胞及疫苗等的开发提供一种新的手段.

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