2结果
2.1细胞形态最初纯化的细胞部分在相差显微镜下可见扇形细胞质（fanlike membranes）（图1）,经过一段时间传代，细胞呈上皮样细胞排列, 单层贴壁生长,有铺路石征，生长成团后即出现重叠生长现象，细胞以多边形为主（图2）. HE染色见细胞轻度嗜碱,核大,核质比例异常, 细胞呈异型性明显，可见较多核分裂象(图3).
2.2生长特性细胞生长于第3日达到高峰. 细胞倍增时间为26.4 h. 第55代细胞的生长曲线见图4，细胞分裂指数分别为：24 h，1.9%；48 h，7.0%；72 h，9.3%. 双层琼脂形成率为22.1%.
图1倒置显微镜下兔VX2肿瘤细胞呈扇形细胞质×400（略）
图2传代后倒置显微镜下兔VX2肿瘤细胞呈多边形为主×100（略）
图3兔VX2肿瘤细胞形态 ×100（略）
2.3免疫组织化学染色细胞胞质中可见到PCK免疫组织化学染色弱阳性，波纹蛋白染色阴性.
2.4染色体分析在100个分裂中期细胞中，染色体数目主要分布于57～62之间，染色体众数为60，多为亚三倍体. 染色体有缺失、断裂、易位等结构异常.
2.5细胞周期分析流式细胞仪分析结果显示G0/G1：74.61%； G2/M：7.78%； S：17.6%； G2/G1：1.87；DI：2.40.
图4第55代细胞的生长曲线（略）
2.6同种异体移植及裸鼠移植以1×109个/L细胞密度接种的3只兔子均未成瘤；以1×1010个/L接种的有2只成瘤，其中1只于3 wk后停止生长，解剖后可见瘤体基本为豆渣样坏死；以1×1011个/接种的有2只成瘤. 3只成功成瘤的兔子成瘤潜伏期约10 d，分别于36，38，45 d后衰竭死亡. 解剖后可见瘤体无包膜，呈侵润性生长，中心豆渣样坏死，多有大量脓血，广泛转移，与传统组织块接种法成瘤特点一致. 3只裸鼠均成瘤（图5）.
图5兔VX2细胞裸鼠移植，可见后肢皮下有成瘤现象（略）
2.7支原体及致高钙血症能力检测支原体检测阴性. 动物在接种后1 wk化验血钙波动在2.1～2.5 mmol/L之间.
3讨论
兔VX2肿瘤是世界上广泛使用、可在大型动物体内生长的恶性肿瘤，常用于恶性肿瘤介入和射频治疗的研究［3-5］及影像学研究和动物模型的建立［6-7］，其优越性是小型实验动物肿瘤模型所无法比拟的. 国内经常采用部位命名法来命名VX2肿瘤，如兔VX2肝癌，却忽视了VX2瘤是乳头瘤恶变而成的上皮来源的恶性肿瘤. 国外对于体外VX2细胞系的建立一直有争议，Osato等最早与1967年体外培养的VX2细胞由于培养箱故障而丢失［8］，Voelkel等［9］建立了一株VX2细胞系，活力成瘤能力低，并且丧失了产生PGE2的能力，没有受到公认. 1982年Easty等［10］建立了VX2细胞系，与此同时瑞士的Rolf等也建立了该细胞株，并与之有差异，而比较结果没有报道，细胞系也没有广泛应用. 1985年Georges等［11］发现了2种不同的VX2瘤株，一种VX2R高表达角蛋白，信捷职称论文写作发表网，仅能在裸鼠体内成瘤，另一种VX2R低表达角蛋白，成瘤能力强. Dabbous等［12］1980年也曾发现3种形态不同的VX2细胞. 刘险峰等［13］纯化了一株高表达角蛋白，高成瘤能力的VX2瘤株. 本实验纯化的VX2瘤株形态学上与文献［8,10,11］的报道结果相似，致高钙血症能力检测，与Doppelt等［14-15］的结果相同，从角蛋白表达低、接种后兔存活期短来看，恶性程度比较高，但是成瘤能力较国内一些研究较弱. 我们还发现接种后有个别肿瘤自发性衰退的现象，与Osato等报道的VX7瘤自发性衰退相似. 结合本实验和国外的文献报道，考虑VX2自身可能发生一定程度的分化，这可能与VX2瘤在国内外多以冰冻组织块法保存有关，发生自发性衰退和恶性程度减低的细胞必然在传代的过程中淘汰，因此怀疑VX2的恶性程度略有增高的可能性大，但是VX2肿瘤的基本性质没有变化，仍然是一株具有很高实用价值的应用与大型实验动物的肿瘤细胞. 1988年VX2瘤株从日本传入我校以来，一直主要以液氮冷冻组织块和动物体内传代结合的方法保存，为进行进一步体外研究，我们纯化了该细胞系，经过长时间传代，性质稳定，可用于体外实验. 实验中发现的低细胞数量下成瘤能力下降和自发性消退现象，其原因尚需进一步研究.
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