【关键词】  血管内皮生长因子类；P33ING1；胃肿瘤；免疫组织化学

　　Relationship  of vascular endothelial growth factor and p33ING1 with biological behaviors of gastric carcinoma

　　【Abstract】 AIM: To study the expressions of vascular endothelial growth factor(VEGF) and P33ING1  in  gastric carcinoma, and their relations to the clinicopathological features. METHODS: VEGF  protein and P33ING1 protein expressions in 102 cases of human gastric carcinoma tissues and normal tissues around the foci were examined by using immunohistochemistry. RESULTS: The expression of VEGF was high in carcinoma tissues while low in normal tissues(χ2=68.0, P<0.01), as for P33ING1, the patter  was contrary(χ2=40.3, P<0.01). The expression of VEGF was related to serosa invasion, TNM stage, lymph node metastasis and 5year survival rate (P<0.05). There was a close relation between the expression of P33ING1 and tumor location, serosa invasion, TNM stage, lymph node metastasis and 5year survival rate (P<0.05). CONCLUSION:  VEGF and P33ING are positively correlated with biological behaviors of gastric carcinoma, suggesting that examination by using immunohistochemistry  for  VEGF and P33ING1 may be of value in making diagnosis, evaluating evolution of disease in patients with gastric carcinoma at the same time.

　　【Keywords】  vascular endothelial growth factors; p33ING1;  stomach neoplasm; immunohistochemistry

　　【摘要】 目的： 研究血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）和抑癌基因P33ING1蛋白表达与胃癌临床特征之间的关系. 方法： 采用免疫组化法检测102例胃癌患者手术切除的癌组织和癌周正常组织中VEGF 和P33ING1表达水平.  结果： VEGF在正常组织中呈高表达，在肿瘤组织中呈低表达，两者比较差异有统计学意义（χ2=68.0, P<0.01）；P33ING1在正常组织中呈高表达，在肿瘤组织中呈低表达，两者比较差异有统计学意义（χ2=40.3, P<0.01）. VEGF蛋白表达水平与胃癌浆膜浸润、TNM分期、淋巴结转移、5 a生存率有关(P<0.05)，P33ING1蛋白表达水平与胃癌肿瘤部位、浆膜浸润、TNM分期、淋巴结转移、5 a生存率有关(P<0.05). 结论: VEGF与P33ING1的表达和胃癌生物学行为有关，同时进行VEGF与P33ING1免疫组化法检测对胃癌患者病情判断和预后评价有一定的临床意义.
 
　　【关键词】 血管内皮生长因子类；P33ING1；胃肿瘤；免疫组织化学

　　0引言

　　胃癌是我国人群中常见的消化道恶性肿瘤之一，其死亡率高居恶性肿瘤死亡率前几位，然而有关胃癌发生发展确切的分子机制仍不十分清楚，其中血管生长因子及抑癌基因的影响倍受关注. 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF )是目前发现最重要的血管生长因子，它与肿瘤患者预后是近几年的研究热点，P33ING1是新近克隆出来的一种抑癌基因，在人类许多肿瘤组织中发现存在P33ING1表达降低，并参与部分肿瘤的演进过程. 我们采用免疫组化方法检测VEGF和P33ING1蛋白在胃癌中的表达，探讨两者与胃癌生物学行为和预后的关系.

　　1材料和方法

　　1.1材料收集广东医学院附属医院199701/200212病理科归档的病历资料完整的102例胃癌组织标本，按全国胃癌协作组病理规范进行病理诊断和分级，在研究中，将肿瘤细分成两个组织学亚型:分化程度较好包括乳头状腺癌和管状腺癌，分化程度较差包括低分化腺癌、粘液细胞癌和印戒细胞癌，所有患者术前均未行化疗或放疗. 同时另取癌旁非肿瘤的正常组织石蜡标本为对照. 抗VEGF鼠源单克隆一抗购自福州迈新试剂公司；抗P33ING1鼠源单克隆一抗购自美国抗体诊断试剂公司，为杂交瘤培养上清，不稀释；Envision免疫组织化学试剂盒购于丹麦Dako公司.
 
　　1.2方法

　　1.2.1常规病理学检查所有标本均经体积分数为40 g/L甲醛固定,常规石蜡包埋切片,HE染色供病理观察. 肿瘤组织学分级参照国际胃癌组织学分级标准.
 
　　1.2.2免疫组化检测石蜡包埋组织以4 μm厚度连续切片，常规脱蜡至水，切片浸于50mmol/L(PH80)乙二胺四乙酸溶液中，微波抗原修复10 min，冷却至室温,充分水洗，PBS浸洗，信捷职称论文写作发表网，滴加正常山羊血清封闭液，室温20 min；甩去多余液体，不洗，加入VEGF单抗或P33ING1单抗4℃过夜；PBS洗；滴加SP 9000通用型生物素标记二抗，37℃，40  min；DAB显色30 s，苏木素复染，系列乙醇脱水、透明、中性树胶封固. DAB显色液配制：取DAB 5 mg溶于100 mL 0.05 mol/L TrisHCL(pH 7.6)中，加入300 mL/L过氧化氢10 μL，搅拌混匀后过滤(用前新鲜配制)；对照设置：正常小鼠血清代替一抗作替代对照，PBS作空白对照.
 
　　1.2.3阳性结果的判定和图像分析对于VEGF，在光镜下有棕黄色颗粒反应出现在细胞膜、细胞浆中均为阳性反应细胞，高倍镜下阳性细胞数占视野10%以下为阴性(-)；高倍镜下阳性细胞数占视野10%以上为有意义，计为阳性. 10%～30%为(+)，30%～50%为()，>50%为()，(+)～()均表示为阳性(+). 对于P33ING1，在光镜下有棕黄色颗粒反应出现在细胞浆中为阳性反应细胞，高倍镜下阳性细胞数占视野25%以下为阴性(-)；高倍镜下阳性细胞数占视野25%以上为有意义，计有阳性. 25%～50%为(+)，50%～75%为()，>75%为()，(+)～()均表示为阳性(+).

　　统计学分析：　统计学处理采用简明统计分析软件. 各组间差异用χ2检验,取α=0.05检验水准.

　　2结果

　　2.1VEGF和P33ING1蛋白在胃癌组织与癌旁正常组织中的表达情况VEGF蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为50.0%（51/102），在癌旁正常组织中的阳性表达率为0，两者比较差异有统计学意义（χ2=68.0, P<0.01）；P33ING1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率为53.9%（55/102），在癌旁正常组织中的阳性表达率为93.1%（95/102），两者比较差异有统计学意义（χ2=40.3, P<0.01）.