鞭类中药饮片的服用方法主要包括研粉吞服、煮食和泡酒内服。谭氏等[5]研究结果表明，狗鞭（黄狗肾）饮片匀浆后的混悬液对肾阳虚型动物有不同程度的壮阳作用；文献报道其主要含雄性激素、蛋白质、维生素E、脂肪和有机纤维等成分[6]。乌鳖颗粒中黄狗肾不同乙醇浓度提取工艺（工艺A和工艺B）的提取物均可使卵巢摘除大鼠血清E2水平增高；此外，用95%乙醇提取工艺（工艺A）制备的提取物还具有较好的提高大鼠雌激素活性，促进子宫、卵巢生长的作用，这与乌鳖颗粒治疗卵巢功能早衰目的一致。综合上述分析，方中黄狗肾饮片应用95%乙醇提取。

　　1 实验材料

　　1.1 动物

　　雌性SD大鼠，体重120～140 g,由浙江大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（浙）2008-0033。ICR小鼠，体重14～18 g,由扬州大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（苏） 2007-0001。

　　1.2 仪器

　　SP-756PC型紫外可见分光光度计；LDZ5-2型离心机；r-911全自动放免计数仪；FA1004电子分析天平。

　　1.3 药物与试剂

　　六味地黄丸。黄狗肾及方中饮片均购于江苏省医药公司，经鉴定符合相关要求。红四氮唑（TTC,上海试剂三厂，批号961115）；四氯乙烯；无水乙醇。雌二醇（E2）试剂盒；促卵泡激素（FSH）试剂盒；黄体生成素（LH）试剂盒。

　　2 方法与结果

　　2.1 供试液制备方法

　　工艺A提取液：按处方比例称取饮片，黄狗肾加10倍量95%乙醇回流提取2次，每次1 h,滤过，药液与药渣备用；枸杞子、茯苓加10倍量水煎煮2次，每次1 h,滤过，合并滤液，浓缩至相对密度为1.20（60 ℃测）的浸膏，备用；黄狗肾药渣与方中其他饮片加10倍量水煎煮2次，每次2 h,滤过，合并滤液，浓缩至相对密度1.15（80 ℃测），加乙醇至含量为60%,静置48 h,抽滤，滤液与黄狗肾液合并回收乙醇至尽，再与枸杞子、茯苓提取液合并即得。

　　工艺B提取液：按处方比例称取饮片，黄狗肾加10倍量70%乙醇回流提取2次，每次1 h,滤过，药液与药渣备用；其余6味饮片的处理同工艺A。阳性对照液：取六味地黄丸捣碎，研成粉状，然后加入蒸馏水混溶，即得。阴性对照液：按处方比例称取饮片（缺黄狗肾），饮片的处理同工艺A。

　　2.2 对幼鼠子宫、卵巢发育的影响

　　取未成熟ICR健康雌性幼鼠（体重14～18 g）60只，随机分为空白对照组（灌胃等量生理盐水）、阳性对照组（4.5 g/kg）、工艺A组（16.5 g/kg）、工艺B组（16.5 g/kg）、阴性对照组（16.5 g/kg）。各组均灌胃给予相应药物，剂量0.2 mL/10 g, 1次/d×10 d。末次给药后12 h,脱颈椎处死，解剖，取子宫、卵巢、脾、胸腺，分离脂肪，迅速以电子天平称重。计算脾、胸腺、卵巢、子宫系数 [2]。结果表明，工艺A组促进子宫、卵巢和胸腺生长，与空白组比较差异有统计学意义（P<0.05）。提示工艺A组具有促进子宫、卵巢发育的作用。

　　2.3 对卵巢摘除大鼠雌激素活性的影响

　　取雌性SD大鼠85只，除正常对照组10只外，其余75只去除双侧卵巢，手术后2周，将手术成功的大鼠随机分组，每组10只。各组按下述剂量每日灌胃给予相应药物1次，正常对照组和模型组：等量生理盐水；阳性对照组：3 g/kg六味地黄丸；工艺A组：11 g/kg;工艺B组：11 g/kg;阴性对照组：11 g/kg。每日灌胃1次，连续给药4周。末次给药30 min后，每鼠阴道内缓缓注入新鲜配制的25 mg/mL TTC水溶液0.1 mL,于阴道内停留30 min,取血，离心，取血清测E2、FSH、LH水平。立即处死，剪取大鼠阴道，纵行切开，分离阴道，剪碎后置离心试管中，加入无水乙醇和四氯乙烯混合溶液4 mL,浸泡提取2 h, 2 000 r/min离心5 min。吸取上清液，以无水乙醇和四氯乙烯混合液作空白对照，于490 nm处测定A值[2-4]。

　　结果表明，工艺A组和工艺B组均可使卵巢摘除大鼠血清E2水平增高，与模型组比较差异有统计学意义（P<0.01）。提示工艺A组和工艺B组具有调节机体激素水平的作用。工艺A组的OD值与模型组比较差异有统计学意义（P<0.01），提示工艺A组可明显增加大鼠阴道角化上皮细胞，具有提高雌激素活性的作用。