2 结果

　　2.1 苯唑西林对金葡球菌ATCC25923的MIC为0.25mg/L。

　　2.2 苯唑西林对金葡球菌ATCC25923青霉素结合蛋白的亲和力见Fig.1。从图中可知,金葡球菌标准株内膜蛋白质经荧光放射自显影后可见5条蛋白质条带(即5种青霉素结合蛋白PBP1~PBP5),分子量分别约为87、80、75、70和41kD,与国外文献[5]报道一致。X光片上自显影象强度反应了抗生素与青霉素结合蛋白的亲和力,影象强度越强(即蛋白质条带黑度越深,亲和力越弱,反之,亲和力越强。从图上可见,苯唑西林浓度从0~128mg/L递增时, PBP1和PBP2尤以PBP2影象强度逐渐减弱,即与抗生素亲和力逐渐增加。PBP4在高浓度苯唑西林存在时影象强度减弱。PBP3和PBP5影象强度变化不大。说明金葡球菌PBP1、PBP2尤以PBP2是苯唑西林的主要作用靶位,即是苯唑西林的致死靶位。

　　Fig.1  Competition of oxacillin for PBPsofS.aureusATCC25923a~k:oxacillin concentrations 0,0.06,0.125, 0.25, 0.5, 1,2,4, 8,32,128mg/L respectively

3 讨论

　　早在20世纪40年代已在形态学和生物化学方面对青霉素作用机制进行了初步探索,证明青霉素特异地干扰细菌细胞壁肽聚糖的生物合成。1965年,Wise和Park[6]对经青霉素处理的金葡球菌进行了细致的生化研究,提供了青霉素抑制细菌细胞壁合成过程中交联反应的直接证据,提出了青霉素作用机制经典学说。70年代Spratt等[1]将电泳技术与荧光放射自显影术相结合,建立了青霉素结合蛋白的研究方法。由于青霉素G与所有的青霉素结合蛋白都具有良好的结合,所以目前采用其标记物对PBPs从分子水平上进行探讨。

　　β-内酰胺类抗生素首先同细胞膜上的PBPs结合,这些PBPs具有酶活性,参与细菌细胞壁肽聚糖的合成。肽聚糖主要负责维持细菌细胞壁的完整性,β-内酰胺类抗生素与PBPs结合干扰了PBPs正常的酶功能,使细胞壁正常合成阻断。不同的β-内酰胺类抗生素与不同的PBPs结合,结合后或引起细菌自溶,或形成球形体,或成丝状细胞,最终细菌分裂停止而死亡。本研究表明,敏感的金葡球菌有5种PBPs,2种必需的PBPs(PBP1,PBP2)与苯唑西林具有强大的亲和力。国外对金葡球菌的PBPs已进行了多方面研究[7,8],金葡球菌的PBP1、PBP2、PBP3是抗生素的主要作用靶位,与β-内酰胺类抗生素具有很高亲和力。PBP1可能是原始肽糖转肽酶(peptidoglycantranspetidase),PBP2是静止期细胞具有转肽酶功能,PBP3是一种与分隔有关的转肽酶,PBP4是一种涉及到转辅助肽糖交联的DD-羧肽酶和转肽酶。由于苯唑西林与金葡球菌的2种致死性的PBPs(PBP1,PBP2)具有很高的亲和力,说明苯唑西林对敏感的金葡球菌

　　具有很强的杀菌作用。因此,在临床上对于非耐药性金葡球菌感染仍可选用苯唑西林等β-内酰胺类抗生素治疗。

　　参考文献

　　1 Spratt B G, Pardee A B. Penicillin-binding pro-teins and cell shape inE.coli. Nature,1975;254:516

　　2 Lowry O H, Rosebrough N J, Farr A Let al.Protein measurment with the Folin-phenol rea-gent. J Biol Chem,1951;193:265

　　3 Yan S Z, Bohach G A, Stevens D L. Persistant a-cylaction of high-molecular-weight PBPs by peni-cillin induces the postantibiotic effect inS.pyo-genes. J Infect Dis,1994;170:609

　　4 Georgopapadakon N H, Liu F Y. Penicillin-binding protein in bacteria. Antimicrob AgentsChemother,1980;18:148

　　5 Georgopapadakou N H. Penicillin-binding prote-ins and bacterial resistance toβ-lactams. Antimi-crob Agents Chemother,1993;37:2045

　　6 Wise E M, Park J J. Penicillin: its basis site ofaction as an inhibitor of peptide crosslinking reac-tion in cell wall mucopeptide synthesis. Proc NatlAcad Sci USA,1965;54:75

　　7 Georgopapadakou N H, Dix B A, Mauniz Y R.Possible physiological functions of penicillin-bin-ding proteins inStaphylococcus aureus. Antimi-crob Agents Chemother,1986;29:333

　　8 Mwyke A W, Ward J R, Hayes M Vet al. A rolein vivo for penicillin-binding protein 4 ofStaphy-lococcus aureus. Eur J Biochem,1981;119:389