论文关键词 单核细胞趋化蛋白1 牙髓炎 免疫组化?

　　论文摘要 目的：探讨单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）在牙髓炎发生、发展中的作用机理，为揭示MCP-1对牙髓炎性疾病发生、发展的作用提供依据。方法：采用免疫组织化学方法检测正常人及急、慢性牙髓炎患者牙髓组织中MCP-1的表达。结果：MCP-1在正常牙髓组织中无表达，在炎症组织中有不同程度的表达。?
　　 　　
　　资料与方法?
　　
　　检测标本来自长春市口腔医院2004年3～9月口腔内科门诊患者，急、慢性牙髓炎各20例，健康牙髓20例（烤瓷牙需要拔髓者），患者年龄18～50岁,所有患者2个月内无服用免疫抑制剂及抗菌药物史,均未做过牙髓治疗。?
　　标本处理：标本用10%中性福尔马林浸泡，常规脱水，石蜡包埋，制备4～5μm厚切片，分别作HE染色和免疫组化染色。HE染色结果作为病理学分组标准，进一步区分各组标本。?
　　主要试剂、仪器：MCP-1单克隆抗体（TBD公司），SABC显色试剂盒（武汉博士德公司），S-P超敏试剂盒（迈新生物）。?
　　免疫组化染色步骤：石蜡切片常规脱蜡水化，PBS冲洗3分钟×3次，高温加热修复抗原（加热至95℃关火，室温放置自然冷却，蒸馏水冲洗3次，PBS浸泡5分钟）；PBS冲洗3分钟×3次；滴加过氧化酶阻断溶液（试剂A）室温下孵育15分钟，以阻断内源性过氧化物酶的活性；PBS冲洗3分钟×3次；滴加正常非免疫动物血清（试剂B），室温下孵育10分钟；除去血清，滴加第一抗体（稀释浓度1∶[KG-*2]50），4℃过夜。PBS冲洗3分钟×3次；滴加生物素标记的第二抗体（试剂C），室温孵育10分钟，PBS冲洗3分钟×3次；滴加链霉素抗生物素-过氧化物酶溶液（试剂D），室温孵育10分钟，PBS冲洗3分钟×3次；DAB显色，自来水冲洗，苏木素复染，梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。阴性对照采用PBS代替一抗,其余步骤相同。?
　　
　　结果?
　　
　　免疫染色结果显示，在健康牙髓组织中未见明显的MCP-1表达阳性细胞，在急慢性牙髓组织中MCP-1有不同程度的阳性表达，阳性染色细胞数量不均，阳性染色程度不一致，阳性表达为分布于细胞浆呈棕黄色的颗粒状物。表达MCP-1的细胞主要是单核/巨噬细胞和血管内皮细胞,中性粒细胞，成纤维细胞。在慢性炎症牙髓组织中还可观察到新生的毛细血管上有MCP-1表达阳性细胞。急、慢性组阳性表达无统计学差异。?
　　
　　讨论?
　　
　　MCP-1在炎症性疾病中的作用：大量的炎性疾病中都发现了MCP-1的存在,与单核/巨噬细胞免疫作用有关的疾病大多有MCP-1的参与。?
　　首先，MCP-1对单核/巨噬细胞具有激活和趋化的双重作用。实验证明MCP-1促使嗜碱性粒细胞释放组胺的速度相当快，能在1小时内达到最高水平。MCP-1在炎症反应时与单核/巨噬细胞、淋巴细胞、嗜碱性粒细胞的激活有关联，在免疫应答中起重要作用，具有促炎的作用。?