作者：杨桂兰，陈志强，郑家润，李新宇

【关键词】  银屑病；淋巴细胞；受体CXCR3；趋化因子,CXC

　　Expression of CXCR3 mRNA in peripheral blood lymphocytes and neutrophils in patients with psoriasis

　　【Abstract】 AIM: To investigate the expression of chemokine receptor CXCR3 mRNA in peripheral blood lymphocytes and neutrophils in patients with progressive plaque psoriasis and its correlation with Psoriasis Area and Severity Index (PASI).   METHODS: Reverse transcriptasepolymerase chain reaction (RTPCR) was applied to semiquantitatively analyze CXCR3 mRNA expression in peripheral blood    lymphocytes and neutrophils from 33 psoriatic cases, 16 cases with about 70% remission of the 33 patients after treatment and 30 healthy controls.  The correlation between CXCR3 mRNA expression and PASI was evaluated.  RESULTS: CXCR3 mRNA level in lymphocytes from psoriatic patients was 1.12±0.81, markedly higher than that in normal controls （0.28±0.28, P<0.01）and treated patients(0.57±0.61, P<0.05).  Furthermore, a positive correlation was noticed between CXCR3 mRNA expression and PASI(r=0.516, P<0.05). However, there was no statistic significance in CXCR3 mRNA level in neutrophils among pretreated psoriatic patients(1.72±1.68), normal controls (1.27±1.17, P>0.05) and treated patients(1.27±1.01, P>0.05).  CONCLUSION: The increased expression of CXCR3 in lymphocytes may be associated with migration and aggregation of lymphocytes in psoriatic lesion, suggesting that this chemokine receptor be involved in the pathogenesis of progressive plaque psoriasis.
  
　　【Keywords】  psoriasis; lymphocytes; receptor CXCR3, chemokines, CXC

　　【摘要】 目的： 了解银屑病患者外周血淋巴细胞与中性粒细胞中CXC型趋化因子受体CXCR3 mRNA的表达水平及其与银屑病皮损面积和严重程度指数（PASI）之间的关系. 方法： 应用逆转录聚合酶链反应（RTPCR）法检测进行期斑块型银屑病患者33例及其中16例患者治疗后外周血淋巴细胞及中性粒细胞中CXCR3 mRNA的表达水平，设30例健康人作为正常对照，并将检测结果与PASI进行了相关性分析. 结果：  斑块型银屑病患者外周血淋巴细胞中CXCR3 mRNA表达水平为1.12±0.81，明显高于健康对照组（0.28±0.28, P <0.01）与治疗后患者（0.57±0.61, P<0.05 ），并与PASI之间呈明显正相关(r =0.516, P<0.05)；而中性粒细胞中CXCR3 mRNA表达水平为1.72±1.68，与健康对照组(1.27±1.17)及同一组患者治疗后（1.27±1.01）相比均无明显差异 (P>0.05). 结论： CXCR3可能主要通过活化与趋化外周血淋巴细胞而参与了银屑病的发病机制.
 
　　【关键词】 银屑病；淋巴细胞；受体CXCR3；趋化因子,CXC

　　0引言
 
　　银屑病的病理特征之一为表皮和真皮中白细胞浸润，其中主要为中性粒细胞及淋巴细胞. 趋化因子是主要使细胞发生趋化作用的细胞因子，分为CXC, CC, XC及CX3C四型. 趋化因子通过与其特异性受体结合发挥作用，相应的趋化因子受体也分为CXC, CC, XC及CX3C四型. 大量研究结果显示趋化因子及其受体系统参与了炎症的发病机制，尤其与炎症细胞向皮损局部的移行关系密切. 银屑病患者外周血中性粒细胞中趋化因子受体CXCR1与CXCR2 mRNA的表达增高，可能参与了中性粒细胞的活化及其向皮损部位的趋化［1］. CXCR3为CXC型趋化因子干扰素诱导的单核因子（Mig）及干扰素诱导蛋白10（IP10）的特异性受体，有报道Mig mRNA在银屑病皮损部位真皮上部高表达［2］. 目前对银屑病患者外周血淋巴细胞与中性粒细胞中CXCR3的表达情况仍不明确.

　　1材料和方法

　　1.1材料明确诊断的中、重度进行期斑块状银屑病患者33例，均为200203/200212在中国医学科学院皮肤病医院就诊的门诊或住院患者，其中男19例，女14例，年龄18~65岁，病程4 mo~40 a. 用银屑病皮损面积和严重程度指数（ psoriasis area and severity index, PASI）来评估患者的疾病严重程度. 入选标准： 年龄在18周岁以上，临床诊断明确，PASI评分在8.4以上；近3 mo内未用过维甲酸制剂、皮质类固醇激素及免疫抑制剂，1 mo内未用过治疗银屑病的内服及外用药物，无其他系统性疾病或皮肤疾病；女性患者排除怀孕、哺乳及月经期. 健康对照30例，均来自中国医学科学院皮肤病研究所研究生、体检职工及皮肤外科整形美容的患者，男17例，女13例，年龄18~50岁（ 经统计学处理，年龄、性别与银屑病患者组无统计学差异 ）. 对符合上述入选标准的患者详细记录病史资料，进行血常规检查，征得患者本人同意后自肘静脉取血8mL加入肝素抗凝管备分离，标本收集完毕后根据患者病情给予相应的抗银屑病药物治疗［1］至皮损消退70%以上时再次进行血常规检查，取疗后血，并再次记录患者的PASI评分，共收集到治疗后患者16例（男9例，女7例，年龄22~58岁）.
 
　　Hema  480基因扩增仪（珠海黑马医学仪器有限公司），TFX20M紫外检测仪（Vilber lourmat法国），信捷职称论文写作发表网，CS9000双波长飞点薄层扫描仪（日本岛津），TRIzol （GIBICO/BRL）， SuperScriptTM FirstStrand Synthesis System for RTPCR（ Invitrogen ）.  特异性引物CXCR3  5′ TCCTTGAGGTGAGTGACCACAAA3′, 5′CTCGTCGTGGTGGGCCGACAG3′，扩增片段为584 bp；β肌动蛋白5′CAACTCCATCATGAAGTGGTAAC3′，5′CCACACGGAGTACTTGCGCGCCTC3′，扩增片段为180 bp. 由上海生工生物工程技术服务有限公司合成.
 
　　1.2方法用RTPCR方法检测淋巴细胞与中性粒细胞中CXCR3的基因表达水平. 用60 g/L葡聚糖溶液沉降红细胞，淋巴细胞分层液分离淋巴细胞与中性粒细胞，显微镜下记数2×106个细胞. 总RNA提取试剂TRIzolTM提取淋巴细胞与中性粒细胞总RNA. 紫外分光法检测RNA纯度，TBE/琼脂糖电泳检测RNA的完整性. 严格按照Invitrogen的试剂盒说明书进行操作反转录合成cDNA. 以cDNA为模板建立PCR反应体系：反应总体积为25 μL，反应程序为： 94℃变性45 s, 57℃退火45s, 72℃延伸1 min，首次循环94℃预变性5 min，共进行35个循环，最后72℃延伸7 min. 以β肌动蛋白作为内参照进行半定量，CXCR3与β肌动蛋白同管扩增. PCR产物用20 g/L琼脂糖凝胶电泳检测，以每厘米胶长5 V的电压进行电泳，50 min后在紫外检测仪上观察结果并进行近距离摄影，用薄层扫描仪扫描胶片，基因表达水平以内参照β肌动蛋白基因为基准校正后获得.
 
　　统计学处理： 采用SPSS10.0软件处理，数据以x±s表示，治疗前后数据用配对资料t检验分析，基因表达量用OneWay ANOVA (单因素方差分析)方法，两两比较用最小显著差数法（Leastsignificant difference）检验. 相关性分析采用Pearson线性相关.  P<0.05为有统计学意义.

　　2结果

　　治疗前患者的PASI评分为8.4~47.2（27.3±8.8）. 所收集到的治疗后患者的PASI评分为1.2~15.3（5.0±3.9），经统计学分析，比相应患者治疗前的PASI评分(10.8~47.2, 25.6±10.8)下降，差异具有统计学意义(P<0.05).
 
　　进行期斑块状银屑病患者淋巴细胞及中性粒细胞中CXCR3 mRNA的平均表达水平见表1及图1. 银屑病患者治疗前外周血淋巴细胞中CXCR3 mRNA表达水平明显高于健康对照组(P<0.01) 及16例治疗后患者(P<0.05)，并与PASI之间呈明显正相关(r=0. 516, P<0.05），而16例治疗后患者与健康对照组相比无统计