养需注意以下几点：（1）体积较大的卵巢巧克力囊肿，其内皮分离培养后，细胞数量很少，不易分离培养成功。（2）巧克力囊肿内壁有新鲜出血且囊肿体积较小（直径＜3 cm），分离培养后的细胞容易生长。（3）子宫韧带异位结节以及腹膜异位灶的分离培养不易成功，但取材时若能获取较大的紫红色异位结节，亦可分离出数量较多的间质细胞和腺上皮细胞。（4）本研究中内膜标本消化时使用的是Ⅳ型胶原酶和DNaseⅠ，虽然价格较常用的胰酶贵，但是经其消化后的间质细胞容易贴壁生长。可以适当延长Ⅳ型胶原酶和DNaseⅠ的消化时间（一般为2 h），使内膜组织充分消化以获取更多的细胞。而胰酶消化时间过长会影响细胞的活性，使间质细胞不易贴壁，甚至造成细胞培养失败。（5）在子宫内膜细胞分离培养过程中，离心次数不宜过多，离心转速不宜过高，否则易造成细胞丢失，并影响细胞活性。在本研究中，间质细胞和腺上皮细胞的离心次数不超过4次，而离心转速最高为1 000 r/min。

　　离体在位和异位子宫内膜细胞的爬片，排除了内膜组织中非内膜成分的干扰，有利于进行各项指标的检测，使免疫细胞化学检测定性、定位准确，还能进行半定量分析［12］。

　　在光镜及电镜下，可对3种形态特征的细胞类型进行鉴别：（1）腺上皮细胞；（2）2种形态的间质细胞，其中一种是呈多角形的子宫内膜间质细胞，另一种是呈梭形的子宫内膜间质细胞。透视电镜下EM异位子宫内膜腺上皮细胞中异染色质增多，核增大，这种形态与癌细胞基本相似，可能与EM的恶性行为有关。而EM异位子宫内膜间质细胞的体积比正常对照及EM在位子宫内膜间质细胞小，并且其细胞膜表面有较多的微绒毛和胞浆突起，说明EM异位子宫内膜间质细胞的运动能力和侵袭能力增强。Caetje等［13］用胶原凝胶体实验检测原代培养异位子宫内膜细胞的侵袭活性，结果发现异位子宫内膜细胞的侵袭活性与转移性膀胱癌细胞株（E128）相似，而正常在位子宫内膜细胞与非转移性癌细胞株（RT112）相似，表明无侵袭性，证实了EM具有恶性肿瘤样的侵袭特征。而本实验中所观察到EM异位子宫内膜间质细胞的形态改变，也可能与这种恶性肿瘤样的侵袭特征有关。此外，EM异位子宫内膜间质细胞胞浆内存在不规则线粒体，是否与这种侵袭特征相关，尚待进一步研究。

　　本研究中采取的内膜组织标本均为增生期内膜，今后的研究中需注意补充分泌期的内膜标本，以进一步完善对离体在位和异位子宫内膜的观察和监测，为EM研究提供充分的理论依据。

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