2.3提取回收率分别用甲醇配制头孢噻肟对照品溶液和舒巴坦对照品溶液，同时制备相同浓度的血样和尿样并依法处理，分别进样分析，以血样和尿样中药物峰面积与对照品峰面积比值计算提取回收率(表1).
表1血样和尿样中头孢噻肟和舒巴坦提取回收率（略）
2.4方法精密度
2.4.1头孢噻肟方法精密度取空白血浆加入适量头孢噻肟对照品，配制成低、中、高浓度分别为10, 100和400 mg/L血浆样品，在1 d内按样品测定法重复测定6次，求得日内RSD分别为2.74%, 2.21%和3.40%. 将上述3个浓度的样品在3 d内连续各重复测定6次，求得日间RSD分别为3.13%, 2.85%和3.85%.
2.4.2尿液中头孢噻肟方法精密度取空白尿液加入适量头孢噻肟对照品，配制成低、中、高浓度分别为10, 100和400 mg/L尿液样品，在1 d内按样品测定法重复测定6次，求得日内RSD分别为1.52%, 1.30%和1.14%. 将上述3个浓度的样品在3d内连续各重复测定6次，求得日间RSD分别为1.44%, 1.78%和1.30%.
2.4.3血浆中舒巴坦方法精密度取空白血浆加入适量舒巴坦对照品，配制成低、中、高浓度分别为2.08, 10.4和104 mg/L血浆样品，在1 d内按样品测定法重复测定6次，求得日内RSD分别为3.59%, 2.43%和1.75%. 将上述3个浓度的样品在3d内连续各重复测定6次，求得日间RSD分别为3.20%, 2.80%和2.06%.
2.4.4尿液中舒巴坦方法精密度取空白尿液加入适量舒巴坦对照品，配制成低、中、高浓度分别为2.08, 10.4和104 mg/L尿液样品，在1 d内按样品测定法重复测定6次，求得日内RSD分别为1.46%, 1.09%和0.48%. 将上述3个浓度的样品在3 d内连续各重复测定6次，求得日间RSD分别为1.63%, 1.37%和1.06%.
2.5样品稳定性试验
2.5.1头孢噻肟血浆和尿液样品-20℃放置稳定性试验将低、中、高（10.6, 106和424 mg/L）3个浓度的头孢噻肟血浆样品和尿液样品分别置于-20℃冰箱内1, 2, 3 d；另将低、中、高（10.9, 109和436 mg/L）3个浓度的头孢噻肟尿液样品同法放置，按前述方法测定头孢噻肟浓度变化，血浆中RSD分别为2.51%, 1.46%和2.41%，尿液中RSD分别为0.52%, 2.39%和1.70%. 表明头孢噻肟血浆和尿液样品置于-20℃冰箱3 d内稳定.
2.5.2舒巴坦血浆和尿液样品-20℃放置稳定性试验将低、中、高（2.08, 10.4和104 mg/L）3个浓度的舒巴坦血浆样品和尿液样品分别置于-20℃冰箱内1, 2, 3d；另将低、中、高（2.08, 10.4和104 mg/L）3个浓度的舒巴坦尿液样品同法放置，按前述方法测定舒巴坦浓度变化，血浆中RSD分别为10.33%, 4.73%和8.80%，尿液中RSD分别为0.67%, 0.66%和0.76%. 表明舒巴坦血浆和尿液样品置于-20℃冰箱3 d内稳定.
3讨论
我们采用HPLC法测定生物样本中头孢噻肟和舒巴坦浓度,同文献报道的紫外法［3］、微生物法［4-5］和HPLC法［6-7］相比较,样品预处理简单,测定时间短,方法准确精密,稳定性高,适合药代动力学和临床药物浓度监测应用.
血样处理方法可采用三氯醋酸、高氯酸做蛋白沉淀剂，蛋白沉淀完全，但酸性强，头孢噻肟和舒巴坦分子中含有酯基、酰胺基等结构,溶液中的酸能催化这些基团的水解，经试用这些方法样品中头孢噻肟和舒巴坦均表现不稳定，含量大幅降低. 采用甲醇直接沉淀蛋白, 沉淀离心后直接取上清液测定,使样品处理步骤大大简化,效果良好，回收率高.
流动相未采用易形成结晶的缓冲盐溶液和价格较贵的离子对试剂，而选用甲醇1 g/L三乙胺水溶液的流动相体系,所用试剂价廉低毒, 加入1 g/L三乙胺的目的是掩盖固定相表面游离硅醇基的活性，减少了头孢噻肟和舒巴坦的化学结构中酰胺基团与固定相表面游离的硅醇基发生的相互作用，头孢噻肟和舒巴坦的色谱峰形均较好. 经试验甲醇与1 g/L三乙胺水溶液比例分别为68∶32及84∶16时，头孢噻肟和舒巴坦的保留时间分别为5.8 min和4.5 min，保留时间长短适宜于生物样本的大规模分析的需要.
流动相中水相的pH值在4～7范围内时,舒巴坦保留时间变化不大,而头孢噻肟保留时间则随pH升高而延长,在pH6.2左右时各峰保留时间合适,且峰型较好,无明显拖尾,故以pH6.2±0.1作为水相的pH值,实际效果理想.
紫外扫描测得头孢噻肟的最大吸收波长为240 nm, 但254 nm处吸收也较高,并且254 nm处干扰更少，故选254 nm为检测波长. 舒巴坦最大吸收波长为210 nm，但系末端吸收，干扰较大，选择220 nm为检测波长较适宜.
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