2?3  回收率测定  对玉米做黄曲霉毒素(B+G)0?30，2?10和10?40μg／kg3个加标浓度的回收率实验。其中0?3μ／kg加标回收率的范围为112?05％～88?04％，平均回收率98?63％；2?1μg／kg加标回收率的范围为8?13％～86?58％，平均回收率94?56％，10?4μg/kg加标回收率的范围为117?24％～109?04％，平均回收率112?05％。对花生做黄曲霉毒素(B+G)0?50，2?00和4?00μg／kg 3个加标浓度的回收率实验。其中0?5μg/kg加标回收率的范围为103?75％～77?38％，平均回收率88?66％；2?0μg／kg加标回收率的范围为103?86％～75?67％，平均回收率87?50％；4?0μg/kg加标回收率的范围为97?96％～75?76％，平均回收率85?60％。

　　2?4  试剂盒稳定性试验  经37℃稳定试验，试剂盒在37℃下存放96h，超过96h后其吸光度值开始下降并A<0?6。

　　2?5  方法的重复性和再现性  经ELISA测定其2个加标水平(2?0～4?0μg／kg)实验室内变异系数分别是4?1％和6?3％；实验室间平均变异系数分别为7?9％和8?3％。

　　2?6  方法的专一性  将试剂盒所用抗体与T-2毒素、赭曲霉毒素A、展青霉素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、伏马菌素B1等其他真菌毒素和牛血清白蛋白进行交叉反应试验，其交叉反应率均<0?1％，说明该试剂盒有很好的专一性。

　　2?7  试剂盒与HPLC方法验证  分别使用本研究研制的试剂盒和高效液相色谱（HPLC）方法对玉米、花生盲样同时进行检测，并将2种方法的检测结果进行T检验，P>0?05，说明2种方法对样品的检测结果差异无统计学意义。

　　3  讨论

　　黄曲霉毒素对人和动物均产生严重的危害，是各国对粮食和饲料重点监控的指标。由于黄曲霉菌株培养物可同时产生AFB1、AFB2、AFG1和AFG2，而且黄曲霉毒素的毒性具有协同作用，因此，检测食品中总黄曲霉毒素的污染水平具有重要意义。本研究在制备出针对黄曲霉毒素B1,B2、G1、G2均有较好的交叉反应并且有较好的灵敏度和特异性的单克隆抗体基础上，研制具有我国自主知识产权的总黄曲霉毒素ELISA检测试剂盒。该试剂盒最低检出浓度为0?26μg／kg，对样品的最低检出量为1?5μg／kg，与国外同类试剂盒灵敏度相似。试剂盒所用单克隆抗体与其他参试真菌毒素均无交叉反应，具有较高的特异性。对玉米3个加标水平的平均回收率为98?63％，94?56％和112?05％，对花生的3个加标水平的平均回收率为88?66％，87?50％和85?60％，符合技术要求(70%～120％)。经实验室间验证，此试剂盒再现性和重复性均较好，变异系数（CV）均<20％。以上技术参数均达到试剂盒的技术要求，而且具有简便、灵敏、快速，特异性好并可同时检测大量样品等优点，值得推广应用。本研究成功地制备出针对黄曲霉毒素(B+G)具有高亲合力、高特异性的单克隆抗体，建立了总黄曲霉毒素的ELISA检测方法并研制出具有我国自主知识产权的总黄曲霉毒素ELISA检测试剂盒，对开展全国性黄曲霉毒素污染调查及制定粮食中总黄曲霉毒素推荐限量标准建议值具有科学价值和应用意义。

【参考文献】
  　　〔1〕 Gabal MA,Hegazi SA,Hassanin N.Aflatoxin production by A flavus isolates［J］.Vet Hum Toxicol,1994,34:519-521.

　　〔2〕 中华人民共和国国家标标食品卫生检验方法［J］.2004，189-194.

　　〔3〕 江涛，李凤琴，王环宇，等.赭曲霉毒素A免疫学检测方法的研究［J］.中国公共卫生，2004，20(5)：556-558.

　　〔4〕 董志伟，王琰.抗体工程［M］.2版.北京：北京医科大学出版社，2002：185-187.