作者：王银环，董淑云，张娜，赵利军，李宏杰，孔小燕，刘丽华，张连元
【关键词】 再灌注损伤；肝功能；四肢；牛磺酸
Protective effect of taurine against liver injury after limb ischemiareperfusion in rats
【Abstract】 AIM: To observe the liver injury and investigate the protective effect of taurine on the liver function after limb ischemiareperfusion. METHODS: Thirty Wistar rats were randomly divided into control group，ischemiareperfusion(IR) group and taurine + ischemiareperfusion (TR) group (n=10 per group). The values of XOD, LDH, MDA, AST, ALT and SOD in plasma were respectively measured after 4 h limb ischemia and 4 h reperfusion in each group. XOD, MDA, ROS, MPO and ［Ca2+］ in the liver tissues and GSHPX, ［Ca2+］ in the liver mitochondria were observed. RESULTS: In IR group compared with the control group, the values of LDH ［(190.16±13.36) μkat/L vs (122.39±14.87) μkat/L］, XOD ［(758.82±151.53) nkat/L vs (543.61±43.51) nkat/L］, MDA ［(5.19±0.67) nmol/L vs (1.27±0.21) nmol/L］ , ALT ［(78.40±6.45) nkat/L vs (20.50±3.70) nkat/L］, AST ［(47.70±4.47) nkat/L vs (25.25±2.98) nkat/L］ in plasma increased, but SOD ［(1.30±0.15) μkat/L vs (1.80±0.16) μkat/L ］ reduced, XOD ［(104.69±12.34) μkat/kg vs (59.01±10.50) μkat/kg］, MDA ［(2.66±0.08) nmol/L vs (1.29±0.14) nmol/L］, ROS ［(771.65±100.69) μkat/L vs (606.45±52.01) μkat/L］, MPO (0.47±0.04 vs 0.28±0.06), ［Ca2+］［(0.248±0.050) mmol/L vs (0.123±0.014) mmol/L］ in the liver tissues increased, GSHPx ［(20.34±4.67) nkat/L vs (31.17±11.50) nkat/L］ in the liver mitochondria were obviously reduced, but ［Ca2+］［(0.38±0.06) mmol/L vs (0.14±0.03) mmol/L］ increased; In TR group compared with the IR group, the values of LDH ［(158.29±4.87) μkat/L］, XOD ［(758.82±151.53) nkat/L］, MDA ［(2.81±0.19) nmol/L］, ALT ［(64.40±9.05) nkat/L］, AST ［(38.70±8.10) nkat/L］ were reduced, but SOD ［(1.50±0.17) μkat/L］ in plasma of TR group increased; the values of XOD ［(94.19±13.50) μkat/L］, MDA ［(1.67±0.12) nmol/L］, ROS ［(710.81±55.34) μkat/ L］, MPO (0.36±0.04), ［Ca2+］［ (0.192±0.426) mmol/L］ in the liver tissues decreased, the values of GSHPx［(22.50±3.17) nkat/L］ in the liver mitochondria of TR group obviously increased, but ［Ca2+］ ［(0.31±0.06) mmol/L］ reduced. CONCLUSION: The taurine could protect the liver function of rats after limb ischemiareperfusion.
【Keywords】 reperfusion injury; liver function; extremities; taurine
【摘要】目的： 观察大鼠肢体缺血再灌注后肝脏的损伤性变化，以及牛磺酸对肝脏损伤性变化的保护效应，探讨牛磺酸对大鼠肢体缺血再灌注后肝脏功能保护作用的可能机制. 方法： 实验用Wistar大鼠30只，随机分为对照(control, C)组，缺血再灌注(ischemia reperfusion, IR)组和牛磺酸+缺血再灌注(taurine+ ischemia reperfusion, TR)组，每组10只. 观察缺血4 h再灌注4 h各组大鼠血浆中XOD, LDH, MDA, AST, ALT和SOD的变化；观察肝组织XOD, MDA, ROS, MPO和Ca2+的变化；观察肝线粒体GSHPX和Ca2+的变化. 结果： 单纯肢体缺血再灌注组大鼠血浆中LDH ［(190.16±13.36) μkat/L］, XOD ［(758.82±151.53) nkat/L］, MDA ［(5.19±0.67) nmol/L］, ALT ［(78.40±6.45) nkat/L］, AST ［(47.70±4.47) nkat/L］ 等较正常对照组血浆中LDH［(122.39±14.87) μkat/L］, XOD［(543.61±43.51) μkat/kg］, MDA［(1.27±0.21) nmol/L］, ALT［(20.50±3.70) nkat/L］, AST［(25.25±2.98) nkat/L］明显增加，而SOD［（1.30±0.15) μkat/L］较对照组 (1.80±0.16) μkat/L明显降低；单纯肢体缺血再灌注组大鼠肝组织XOD ［(104.69±12.34) μkat/Kg］, MDA ［(2.66±0.08) nmol/L］, ROS［ (771.65±100.69) μkat/ L］, MPO (0.47±0.04), ［Ca2+］ ［(0.248±0.050) mmol/L］较正常对照组肝组织XOD［(59.01±10.50) μkat/kg］, MDA ［(1.29±0.14) nmol/L］, ROS ［(606.45±52.01) μkat/L］, MPO［(0.28±0.06)］, ［Ca2+］ ［(0.123±0.014) mmol/L］ 均明显增加；缺血再灌注组大鼠肝线粒体GSHPx活性［(20.34±4.67) nkat/L］与正常对照组［(31.17±11.50) nkat/L］比较明显降低，而［Ca2+］浓度［(0.38±0.06) mmol/L］则高于正常对照组［(0.14±0.03) mmol/L］. 牛磺酸+缺血再灌注组大鼠血浆中LDH［(158.29±4.87) μkat/L］, XOD ［(758.82±151.53) nkat/L］, MDA ［(2.81±0.19) nmol/L］, ALT ［(64.40±9.05) nkat/L］, AST ［(38.70±8.10) nkat/L］较单纯缺血再灌注组明显降低，信捷职称论文写作发表网，而SOD ［(1.50±0.17) μkat/L］则增加；肝组织XOD［(94.19±13.50) μkat/L］, MDA ［(1.67±0.12) nmol/L］, ROS ［(710.81±55.34) μkat/L］, MPO (0.36±0.04), ［Ca2+］ ［(0.192±0.426) mmol/L］等指标也较单纯缺血再灌注组明显降低，此外牛磺酸+缺血再灌注组大鼠肝线粒体GSHPx活性［(22.50±3.17) nkat/L］与单纯肢体缺血再灌注组相比明显增加，而Ca2+浓度［(0.31±0.06) mmol/L］则降低，损伤减轻. 结论： 牛磺酸可以减轻大鼠肢体缺血4 h再灌注4 h后所致的肝损伤.
【关键词】 再灌注损伤；肝功能；四肢；牛磺酸
0引言
牛磺酸是体内含量最丰富的氨基酸，具有广泛的生物学作用［1］. 已有很多实验资料［2-6］证明牛磺酸具有清除自由基和抗脂质过氧化作用等. 本实验我们在大鼠肢体缺血再灌注模型上观察肝脏的损伤性变化以及观察预先给予牛磺酸对这一变化的影响，旨在探讨肢体缺血再灌注时远隔器官损伤及其可能的发生机制，以及牛磺酸的保护效应，为避免或延缓肢体缺血再灌注损伤的发生、发展提供理论依据.
1材料和方法
1.1材料健康雄性Wistar大鼠30只，体质量（250±50）g，购自河南医科大学实验动物中心，医动字： D410116号）；所用生化测定试剂盒均购自南京建成生物制品公司，其余所需试剂均为市售分析纯产品，722分光光度计购自上海精密科学仪器公司，低温高速离心机购自德国Hittech公司.
1.2方法
1.2.1模型复制采用本室常规方法［7］制作大鼠肢体缺血再灌注模型，乙醚浅麻醉下用橡皮圈环绕结扎大鼠双后肢根部，阻断血流4 h后松解，恢复血流灌注4 h，自腹主动脉取血处死动物，并收集血液，4℃, 3500 r离心15 min，取血浆，装入干净的Epperdorf管，-70℃保存.
1.2.2动物分组将实验大鼠分笼喂养30 d，术前12 h禁食，自由饮水，室温（25±2）℃，湿度40%~50%. 随机分为3组，每组10只，① 正常对照组： 常规饲养，双后肢松弛环绕橡皮圈，不阻断血流，余操作同缺血再灌注组组. ② 缺血再灌注组： 常规饲养，按模型操作. ③ 牛磺酸+缺血再灌注组： 在缺血再灌注前30 d每天灌服牛磺酸一次，剂量为200 mg/kg体质量，其余操作同缺血再灌注组.
1.3观测指标
1.3.1血浆生化指标测定取血浆测定谷草转氨酶（ALT）,谷丙转氨酶（AST）,乳酸脱氢酶（
