表1总RNA转染DC后对DC表面标记的影响（n=6, %, x±s）
细胞表面标记〖〗加载总RNA, DC〖〗未加载总RNA, DCCD14〖〗10.46±7.52a〖〗26.37±6.63CD40〖〗72.32±13.48a〖〗32.24±10.96CD86〖〗87.69±7.56a〖〗31.35±9.11CD83〖〗30.97±6.57a〖〗17.39±5.22HLADR〖〗93.62±4.83a〖〗67.65±2.36aP<0.05 vs未加载总RNA, DC.
2.2外周血单核细胞来源成熟DC的形态在倒置光学显微镜下，单核细胞培养至7 d时，大部分悬浮生长，可见较多细胞胞体变大且外形不规则,细胞膜呈“树枝状”突起，胞质丰富，具有典型DC形态(图1).
图1成熟DC形态×40
2.3总RNA加载DC的RTPCR测定尤文肉瘤中的特异性序列EWSFLI1可以和引物特异性结合，并且最佳结合温度为54℃（图2）. 经肿瘤总RNA 加载后的DC和肿瘤细胞一样可以和引物特异性结合的序列，而未经肿瘤总RNA加载的DC则无显示，信捷职称论文写作发表网，经尤文肉瘤总RNA加载的DC可以特异性表达尤文肉瘤的特异性序列EWSFLI 1 (图3).
3讨论
尤文肉瘤家族是一种原发性的神经外胚层肿瘤,包括起源于骨及软组织的尤文肉瘤、胸壁的Askin瘤及骨软组织外周的原发性的神经外胚层肿瘤［4］. 95%的尤文肉瘤家族具有特异的染色体异位t(11;22)(q24;q12),从而形成的EWSFLI1融合基因是尤文肉瘤家族发生、进展的主要原因,也是尤文肉瘤家族诊断、治疗及预后的标志物［5-6］.
DC是专职抗原呈递细胞，其独特功能表现在识别和吞噬病原体，将大分子抗原加工成肽段，刺激未致敏T细胞产生特异性免疫应答. 本研究将尤文肉瘤总RNA作为肿瘤抗原加载在DC上，以激发CTL产生抗肿瘤免疫. 因为95%的尤文肉瘤家族均含有特定的EWSFLI1融合基因，因此用含EWSFLI1融合基因的总RNA 去诱导抗肿瘤免疫具有极好的靶向性.
应用尤文肉瘤具有特异的EWSFLI1融合基因，可以表达特异性的抗原的特点，我们将尤文肉瘤的总RNA加载DC, 以诱导抗原特异性CTL. 为了给出其靶向性治疗的实验依据，我们用RTPCR法去检测EWSFLI1mRNA的表达. 在以往的类似试验中，多采用抗原肽脉冲DC，要求对患者的HLA表型，抗原肽的抗原表位有清楚的认识，不能进行很好的靶向性治疗. 我们利用总RNA冲击DC可以包含多种肿瘤抗原的编码信息,包括尚未识别的肿瘤抗原,使肿瘤细胞逃避免疫反应的可能性减小,能诱导广泛的免疫反应［7］，我们将尤文肉瘤总RNA加载DC,表达EWSFLI1融合基因特异性抗原，并应用RTPCR方法证实了加载的确定性，为成熟DC实验如加载后的DC诱导激活CTL反应提供了实验依据.
【参考文献】
［1］ 李用国，梁增伟，蔡大川. 树突状细胞体外激活的CTL杀伤效应［J］. 重庆医科大学学报，2003,7(2):203-205.
［2］ Ike H, Shimada H, Yamaguchi S, et al. Outcome of total pelvic exenteration for primary rectal cance ［J］. Dis Colon Rectum, 2003,46(4):474-479.
［3］ 郭卫，童春容. 恶性肿瘤的免疫治疗进展［J］. 中华骨科杂志，2000,23(S1):51-54.
［4］ West .Ewing sarcoma family of tumors ［J］. Curr Opin Oncol, 2000,12(4):323-327.
［5］ Folpe A L, Hill C E, Parham D M, et al. Immunohistochemical detection of FLI1 protein expression: A study of 132 round cell tumors ［J］. Am J Surg Pathol, 2000,24(12):1657-1668.
［6］ Vicha A, Sumerauer D, Eckschlager T, et al. Detection of minimal residual disease in Ewings sarcoma using RTPCR［J］.Cas Lek Cesk,2001,139(22):685-693.
［7］ Kocature S, Yilmazer D, Onal B, et al. Do micro metastases detected with cytokeratin immunoperoxidase reactivity affect the treatment approch to neck in supraglottic cancers ［J］. OtolaryngolHead Neck Surg, 2003,128(3): 407-413.
