3讨论

    近年研究发现成体组织除骨髓中存在MSCs外，其他中胚层来源的组织如骨、软骨、骨骼肌、表皮等诸多组织中亦存在MSCs［7］. Zuk等采用酶消化筛选法A: Desmin表达  ×200；B: cTNI表达 ×200. 成功从成体大鼠脂肪组织中分离出MSCs，研究发现这种细胞体外可迅速扩增，不易衰老. 并发现ADMSCs象BMMSCs同样具有多向分化潜能，在特定条件下可分化为上皮细胞、成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌细胞, 甚至可横向分化为外胚层的神经细胞等［3-6］. 本实验在Zuk等的分离方法上略加改进，在Ⅰ型胶原酶的基础上加用等体积的胰蛋白酶并将消化时间延长至60 min，获得较好的效果，细胞呈贴壁生长，增殖速度较快. 实验中发现原代细胞混杂有少量圆形及卵圆形细胞，考虑可能是来自于脂肪组织血管基质成分中的其它细胞，但经3～4次传代后细胞在光镜下呈均一梭形生长. 说明从脂肪组织分离的MSCs成分并不纯，但经传代后可在体外得以纯化.

    5aza是现今被公认的能诱导干细胞分化为心肌细胞的最佳诱导药物. Rangappa等［8］用5aza对ADMSCs进行体外定向化学诱导分化为心肌细胞，3 wk时可观察到细胞自发搏动，并证实诱导后的心肌样细胞表达α肌动蛋白（αactin）, CTnI等心肌细胞特异性标志. 本实验中采用10 μmol/L浓度5aza进行诱导24 h，与对照组比较，相差显微镜下观察1 wk后细胞核呈单核位于中央，胞体变大呈多角形，趋向于心肌样细胞生长. ADMSCs经5aza诱导后21 d免疫细胞化学显示有少量Desmin的表达，诱导后28 d时细胞cTNI表达阳性，PTPCR检测到心肌βMHC表达阳性，说明心肌细胞主要标志物的表达具有时间依赖性. cTNI是心肌肌钙蛋白复合体的亚单位之一，参与钙离子介导的肌肉收缩，在胎儿及成人骨骼肌中不表达；心肌βMHC是构成心肌肌球蛋白的重链结构，均具有高度心肌特异性，是现今公认的用于鉴定心肌细胞的特有分子标志. 因此本实验提示ADMSCs经5aza诱导后在分子水平上已具备心肌细胞的特征性变化.

    综合以上实验结果，我们认为脂肪组织中存在大量的具有多向分化潜能的MSCs，其取材较为简便，体外易于分离并可进行迅速扩增，5aza诱导后可向心肌细胞分化，可望成为今后心肌细胞移植的理想细胞来源.

    【参考文献】

    ［1］ Orlic D, Kajstura J, Chimenti S, et al. Bone marrow cells regenerate infracted myocardium［J］. Nature,2001,410(6829):701-705.

    ［2］ Strauer BE, Brehm M, Zeus T, et al. Intracoronary, human autologous stem cell        transplantation for myocardial regeneration following myocardial infarction［J］. Dtsch Med Wochenschr, 2001, 126(3435):932-938.

    ［3］ Zuk PA, Zhu M, Mizuno H, et al. Multilineage cells from human adipose tissue: Implications for cellbased therapies［J］. Tissue Eng, 2001，7(2): 211-228.

    ［4］ Zuk PA, Zhu M, Ashjian P, et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells［J］. Mol Biol Cell,2002，13(12):4279-4295.

    ［5］ Mizuno H, Hyakusoku H. Mesengenic potential and future clinical perspective of human processed lipoaspirate cells［J］. J Nippon Med Sch, 2003，70(4):300-306.

    ［6］ Morizono K, De Ugarte DA, Zhu M, et al. Multilineage cells from adipose tissue as gene delivery vehicles［J］. Hum Gene Ther, 2003，14(1): 59-66.

    ［7］ Minguell JJ, Erices A, Conget P. Mesenchymal stem cells ［J］. Exp Biol Med, 2001, 226(6):507-520.

    ［8］ Rangappa S, Fen C, Lee EH, et al. Transformation of adult mesenchymal stem cells isolated from the fatty tissue into cardiomyocytes ［J］. Ann Thorac Surg, 2003, 75(3): 775-779.