13 统计分析 应用SPSS100软件进行t检验。
2 结果
21 赛莱西布对HepG2细胞增殖的影响 不同浓度赛莱西布作用于HepG2细胞72h后，125，25和50μmol/L干预组的A值分别为139±016，099±012，058±011，均显著低于与对照组A值243±026，差异有统计学意义(P<0001)。表明赛莱西布对HepG2细胞增殖有明显抑制作用，随着药物浓度增大，赛莱西布对HepG2细胞的增殖抑制作用更加明显。
22 赛莱西布对HepG2细胞凋亡的影响(图1) 图1可见，对照组HepG2细胞DNA电泳主要表现为靠近加样孔附近完整的基因组DNA，而赛莱西布干预组HepG2细胞DNA明显降解，可见细胞凋亡的特征性梯状DNA条带。
1：25μmol/L；2：空白对照；3：50μmol/L
图1 不同浓度赛莱西布干预处理48h对HepG2细胞凋亡影响（略）
23 赛莱西布对HepG2细胞caspase-3蛋白表达的影响 Western blot检测结果显示，不同浓度的赛莱西布干预处理HepG2细胞48h，干预组HepG2细胞的capase-3的蛋白表达均明显升高，与对照组比较差异有统计学意义(P<001，图2，表1)。
1：空白对照；2：12.5μmol/L；3：25μmol/L;4：50μmol/L
图2 赛莱西布对HepG2细胞caspase-3蛋白表达水平影响（略）
表1 赛莱西布对HepG2细胞caspase-3蛋白表达水平的影响（略）
24 赛莱西布对HepG2细胞caspase-3活性的影响 125，25和50μmol/L干预组caspase-3活性分别为024±0013，044±0016，071±009，均高于与对照组caspase-3活性001±0012，差异有统计学意义(P<0001)，表明赛莱西布可诱导HepG2细胞caspase-3活性的升高。进一步用caspase-3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO先于赛莱西布与细胞作用，2h后再加入赛莱西布作用24h，发现赛莱西布中Ac-DEVD-CHD处理组HepG2细胞caspase-3活性显著低于赛莱西布组，表明Ac-DEVD-CHO能抑制赛莱西布诱导HepG2细胞的凋亡。
25 赛莱西布对HepG2细胞cox-2活性的影响 125，25和50μmol/L干预组前列腺素E2(PGE2)水平(pg/(ml・106 cells)分别为3610±435，2627±366和1765±273，均显著低于与对照组11228±871，差异有统计学意义(P<0001)，表明赛莱西布可明显抑制HePG2细胞PGE2释放水平。随着药物浓度的增加，信捷职称论文写作发表网，PGE2释放水平逐渐下降，表明赛莱西布可抑制HepG2细胞cox-2活性。
3 讨论
本研究发现，用不同浓度赛莱西布作用于HepG2细胞后，对细胞生长增殖有明显抑制作用，并且随着浓度的增大，这种抑制作用更明显，呈一定的剂量依赖关系。用DNA梯度凝胶电泳法观察赛莱西布对HepG2细胞凋亡的影响，发现赛莱西布干预组的细胞基因组DNA电泳表现为特征性的梯形条带，说明cox-2参与了HepG2细胞凋亡过程。放射免疫法检测显示，HepG2细胞培养上清中有PGE2的释放，赛莱西布可明显抑制HepG2细胞PGE2释放水平，减少PGE2产生。而PGE2是cox-2催化花生四烯酸产生PGs的主要产物，说明赛莱西布可能通过抑制cox-2酶催化活性而减少PGE2产生，从而抑制HepG2细胞增殖，诱导其凋亡。本研究发现，赛莱西布以剂量依赖性方式诱导HepG2细胞caspase-3蛋白表达水平显著增加，其活性也明显升高，提示caspase-3活化介导了赛莱西布诱导的HepG2细胞凋亡。为进一步证实上述结论的可靠性，本研究用caspase-3特异性抑制剂Ac-DEVD-CHO预先作用于HepG2细胞，再施以赛莱西布干预。结果显示，当封闭caspase-3的裂解激活，相同浓度赛莱西布诱导的HepG2细胞凋亡明显受到抑制。提示赛莱西布可通过激活caspase-3而诱导肿瘤细胞凋亡。本研究结果显示，赛莱西布可通过cox-2通路和caspase-3通路抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡。最近，Ferrandina〔9〕等对14例患有头颈部癌的病人给予短时期的赛莱西布处理后，病人平均cox-2表达水平显著降低，Ki67明显下降，肿瘤组织微血管密度值明显降低。结合本研究结果，提示选择性cox-2抑制剂是一种有应用前景的肝癌预防和治疗的化学药物。
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