2.3肝细胞移植后组织学改变Ⅰ组、Ⅱ组实验鼠在肝细胞移植后第3日脾内见大量完整肝细胞，成簇或散在分布于红髓中，白髓边缘多见，部分肝细胞变性坏死（图1，2）；至第7日肝细胞已被大量纤维化条索替代. Ⅲ组大鼠在移植术后第3日，肝小叶结构破坏，肝索紊乱. 肝细胞大片变性坏死，变性为胞浆疏松，可见核固缩或碎裂. 由汇管区开始淋巴细胞、中性白细胞等炎性细胞浸润，坏死区亦见炎性细胞浸润. 肝窦扩张，呈网眼状，可见出血（图3）.
表1各组大鼠肝脏生化指标改变（略）
aP＜0.05 vs Ⅲ组.
图1Ⅰ组大鼠肝细胞移植后第3日（脾脏HE ×200）（略）
图2Ⅱ组大鼠肝细胞移植后第3日（脾脏HE ×200）（略）
图3Ⅲ组大鼠肝细胞移植后第3日（肝脏HE ×200）（略）
3讨论
肝细胞移植可以提供急性肝功能损害的代谢支持，使肝细胞再生到足以支持肝功能或使患者度过急性肝衰的难关而等待原位肝移植，因而成为研究热点之一. 肝细胞移植提高生存率的主要机制包括提供暂时的肝功能支持，以及可通过产生肝细胞生长刺激因子促进残存正常肝脏的再生和功能恢复［8-10］. 研究表明，植入的肝细胞可帮助机体度过肝衰期，提高受体的存活率. 目前，肝细胞移植中的关键，细胞材料方面的研究取得了很大进展，使动物实验的研究水平有了明显提高，且国外临床试验已取得较理想的治疗效果［6］. 为此我们自行建立了一株永生化胚胎肝细胞，并进行肝细胞移植的实验研究，期望使国内肝细胞移植的临床应用成为可能. 本研究表明，异种肝细胞经脾脏移植可显著改善Dgal诱导的急性肝衰竭大鼠的肝脏功能，提高存活率，治疗效果明显，与文献报道一致［11］. 胚胎肝细胞注入脾脏后，在局部形成肝细胞团，利用脾脏血供丰富的特点，发挥肝细胞的代谢功能，使肝衰竭大鼠的肝脏功能得到明显改善，从而提高了大鼠的存活率. 但移植7日后，由于免疫排斥反应的作用，肝细胞大量死亡. 由于采用药物制备急性肝衰竭动物模型，模型鼠7日后大部分死亡，幸存鼠肝功能基本恢复正常. 原代胚胎肝细胞与永生化肝细胞相比，无论在肝功能的改善还是提高存活率方面，均无显著差异. 但从具体数据的比较看，似乎接受永生化胎肝细胞的实验鼠恢复得快一些，可能是由于刚刚分离的原代细胞受到一定程度的损伤，需要一定的恢复时间. 肝脏病理改变与肝功能变化基本平行，细胞移植后第1日，Ⅰ组、Ⅱ组与Ⅲ组比较，肝脏病理均无明显改善. 移植后第3日，移植组肝脏各项生化指标变化明显，与对照组比较有明显恢复. 本研究同时证实，该永生化胎肝细胞具备正常胎肝细胞的功能，进行细胞脾内移植可以起到明显的治疗作用. 相信可以成为肝细胞移植研究中的理想细胞材料，从而为临床肝衰竭患者的治疗提供一种新的选择.
【参考文献】
［1］ Di Campli C, Gasbarrini G, Gasbarrini A. A medicine based on cell transplantationis there a future for treating liver diseases［J］? Aliment Pharmacol Ther, 2003,18:473-480.
［2］ Di Campli C, Nestola M, Piscaglia AC, et al. Cellbased therapy for liver diseases［J］. Eur Rev Med Pharmacol Sci, 2003,7:41-44.
［3］ Leckel K, Blaheta RA, Markus BH. State of hepatocyte transplantation: A risk or a chance ［J］? Zentralbl Chir, 2003,128:283-290.
［4］ Gupta S. Hepatocyte transplantation［J］. J Gastroenterol Hepatol 2002,17:S287-S293.
［5］ Gupta S, Chowdhury JR. Therapeutic potential of hepatocyte transplantation［J］. Semin Cell Dev Biol, 2002,13:439-446.
［6］ Sokal EM, Smets F, Bourgois A, et al. Hepatocyte transplantation in a 4yearold girl with peroxisomal biogenesis disease: Technique, safety, and metabolic followup ［J］. Transplantation, 2003,27:735-738.
［7］ Rust C, Gores GJ. Hepatocyte transplantation in acute liver failure: A new therapeutic option for the next millennium ［J］? Liver Transpl, 2000,6:41-43.
［8］ Kobayashi N, Miyazaki M, Fukaya K, et al. Establishment of a highly differentiated immortalized human hepatocyte cell line as a source of hepatic function in the bioartificial liver ［J］. Transplant Proc, 2000,32:237-241.
［9］ Klocke R, GomezLechon MJ, Ehrhardt A, et al. Establishment and characterization of immortal hepatocytes derived from various transgenic mouse lines ［J］. Biochem Biophys Res Commun, 2002,294(4):864-871.
［10］ Kobayashi N, Fujiwara T, Westeramn KA, et al. Provention of acute liver failure in rats with reversibly immortalized human hepatocytes ［J］. Science, 2000,287:1258-1262.
［11］ Nagata H, Ito M, Shirota C, et al. Route of hepatocyte delivery affects hepatocyte engraftment in the spleen ［J］. Transplantation, 2003,27:732-734.
