工业上提取丹参有效成分主要以热回流法为主，而酚酸类性质不稳定、易氧化水解，因而提取工艺的研究应多指标综合考虑。这里是一篇丹酚酸提取工艺研究，接下来让我们一起来看看吧~

　　【摘要】 目的 优化丹酚酸的提取工艺，进步丹酚酸B的提取率。办法 以喷雾枯燥法取得的丹酚酸固体粉末的收率和丹酚酸B含量爲目标，采用平均设计法优化丹酚酸的乙醇浸提工艺，调查乙醇浓度、提取工夫和提取温度对丹酚酸B提取率的影响。后果 最佳提取工艺爲：45%(体积分数)乙醇，提取工夫爲1 h，提取次数爲2次，提取温度爲70 ℃。结论 提取物中丹酚酸B纯度到达70%以上，优化工艺合理、可行。

　　【关键词】 丹酚酸B;提取工艺;平均设计;大孔吸附树脂

　　丹参水溶性无效成分多具有酚酸性构造，丹参素(化学名爲β3，4二羟苯乳酸，β3，4dihydroxybenyl lacticacid)是各种丹酚酸的根本化学构造：丹酚酸A是一分子丹参素与两分子咖啡酸缩合而成;丹酚酸B爲三分子丹参素与一分子咖啡酸缩合而成;丹酚酸C 则爲二分子丹参素缩合而成;其他丹酚酸亦有相似构造。丹参水溶性成分中的迷迭香酸(rosmarinic acid A，Ros)也是由一分子丹参素和一分子咖啡酸缩合而成。此外，还有四甲基丹酚酸(tetramethyl salvianolic acid A，Sal M)等等[1]。

　　目前，工业上提取丹参无效成分次要以热回流法爲主，而酚酸类性质不波动、易氧化水解，因此提取工艺的研讨应多目标综合思索。选择不波动成分作爲提取工艺挑选的目标性成分，有利于挑选出合理的工艺条件，避免成分在提取工艺中损失过大[2-3]。本研讨以提取物得率和丹酚酸B含量爲目标，停止丹酚酸提取工艺研讨，以确定最佳的提取工艺，探究合适工业化提取的工艺条件。

　　一、仪器与试剂

　　1.1 仪器

　　FA1004N型电子剖析天平(上海精细迷信仪器无限公司)，JZ8002天平(上海精细迷信仪器无限公司)，RE5298A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)，LXJII型离心沉淀机(上海医用剖析仪器厂)，YL015型实验型喷雾枯燥机(上海雅程仪器设备无限公司)，QT330型柱温箱(QM，旗美)，LC10ATVP型泵(日本岛津)，SPD10AVP型紫外检测器(日本岛津)，高效液相色谱柱(Diamonsil 钻石)，电子天平(SHIMADZU AY120)，KQ100型超声波清洗器(昆山市超声仪器无限公司)，pHS25型pH计(上海智光仪器仪表无限公司)。

　　1.2 试药与试剂

　　丹参药材系唇形科动物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的枯燥根和根茎(购自广州市天河宝润堂中药饮片厂)，经广州西医药大学高英主任药师检验，契合《中国药典》2005版一部丹参项下规则。乙醇(剖析纯，天津市富宇精密化工无限公司)，甲醇、乙腈(色谱纯，迪马科技无限公司)，甲酸(剖析纯，广州化学试剂厂)，D101大孔吸附树脂(天津市克复精密化工研讨所)，盐酸(剖析纯，广州市白云区良田黑暗化工厂)， FeCl3(剖析纯，天津市大茂化学试剂厂)，丹酚酸B对照品(批号：200504，中国药品生物制品检定所)。

　　二、方 法

　　2.1 丹酚酸提取工艺

　　2.1.1 实验设计 采用平均设计法，选择影响醇提的3个次要要素：乙醇浓度(A)、提取工夫(B)、提取温度(C)爲调查目标，乙醇浓度选择9个程度，提取工夫及提取温度各选择3程度、各程度循环3次，采用U9(96)表布置实验，见表1。表1 要素程度表

　　2.1.2 样品溶液的制备 取丹参药材100 g，参加3 000 mL的圆底烧瓶中，按表1实验列号各条件操作，于恒温水浴锅中加热浸提，趁热抽滤，滤渣再按原条件停止第2次乙醇浸提，趁热抽滤，兼并2次滤液。 将提取液用旋转蒸发仪停止减压稀释至乙醇除尽，将稀释液用配制好的质量分数10%的盐酸溶液调至pH=3，用离心机(2 000 r/min，5 min)离心稀释液，用布氏漏斗抽滤，作爲样品溶液备用。

　　2.2 大孔吸附树脂别离纯化

　　2.2.1 树脂的预处置 D101树脂用体积分数95%的乙醇浸泡24 h，除去下层漂浮物，湿法装柱，用乙醇活动清洗，应不时反省流出的乙醇液，至乙醇液与水混合(1∶5)不呈白色混浊爲止，然后用水冲洗至无醇味止。

　　2.2.2 丹参提取液别离纯化 离心后的样品溶液经过D 101大孔树脂(药材与树脂用量比爲1∶4;流速爲2.0～3.0 BV/h)，用水停止冲洗，除去水溶性杂质。采用FeCl3检测法，判别洗脱液中有无丹酚酸B成分被洗脱，用水6倍量冲洗，继用体积分数30%的乙醇7倍量洗脱(流速爲0.5～1.0 BV/h) 。搜集体积分数爲30%的乙醇洗脱液，用旋转蒸发仪(60 ℃)减压稀释，稀释至液体绝对密度爲1.15。稀释液喷雾枯燥(进风温度220 ℃，出风温度80 ℃)，最终得淡黄色固体粉末。置枯燥器内，备用。

　　2.3 丹酚酸B含量测定

　　2.3.1 供试品溶液的制备 精细称取丹参提取物粉末10 mg，参加100 mL量瓶中，加水溶解定容，摇匀，过0.45 μm 微孔滤膜，即得。

　　2.3.2 色谱条件 色谱柱: C18(250 mm×4.6 mm，5 μm); 活动相:甲醇水乙腈甲酸(体积比30∶59∶10∶1);流速:1 mL·min-1;检测波长:286 nm;进样量：10 μL;柱温:35 ℃;

　　2.3.3 含量测定办法[4] 精细量取供试品溶液10 μL，注入液相色谱仪中，按“2.3.2”项下条件操作，测定丹酚酸B吸收峰的峰面积积分值，计算丹酚酸B含量。

　　2.4 样品的固形物含量

　　将洗脱液于60 ℃恒温水浴，挥干乙醇和局部水分红稠膏状，膏状物移至真空枯燥箱(60 ℃，0.09 MPa)减压枯燥，置枯燥器0.5 h(防回潮)，待样品冷却后，精细称量。

　　三、结 果

　　丹酚酸提取工艺正交实验后果见表2。将实验数据停止多元回归，求得回归方程Y=1961+2.0861X1+5.4653X2-0.0356X12-2.055X22+0.0186X1X3，R2=0.954 5，F=6.150 1，方程明显无效，并失掉最佳工艺参数爲：乙醇浓度爲45%，提取2次，每次1 h，温度爲70 ℃。对最佳处方停止验证，3批样品丹酚酸B含量辨别爲：70.23%、69.04%、69.69%。

　　四、讨 论

　　4.1 提取丹参药材中水溶性成分丹酚酸B，大局部文献采用水提醇沉法。本文采用乙醇浸提的办法提取，其目的是爲了防止用水提取时提取液中含有糖类等水溶性杂质而使液体黏稠。表2 U9(96)平均设计表及实验后果

　　4.2 丹酚酸B对热不波动，易氧化水解，对受热温度和受热工夫敏感，所以丹参提取液不宜长工夫低温稀释。实验后果标明，丹酚酸提取宜采用减压稀释和喷雾枯燥等工艺，降低工艺进程的温度和受热工夫，有利于提取物中丹酚酸保管率的进步[4]。

　　4.3 将稀释液pH值调至3，可以使局部杂质析出，且酸性体系有利于丹酚酸B水溶液在受热条件下的波动;同时调理溶液的pH可以改动丹酚酸在溶液中的游离形态，酸性条件下丹参酚酸的极性下降，有利于大孔吸附树脂对丹酚酸的吸附。

　　4.4 以体积分数爲95%的乙醇湿法装柱，清洗，然后用水冲洗，冲洗速度宜慢，使大孔树脂堆实以利于吸附药液;药液经过D 101大孔树脂，流速控制爲树脂体积2.0～3.0 BV/h，这样可以使药液与树脂充沛接触，静置一段工夫再用水停止冲洗，洗脱糖等水溶性杂质，而丹酚酸B类成分未被洗脱。用体积分数爲30%的乙醇洗脱，丹酚酸B具有良好的解吸附性。

　　【参考文献】

　　[1] 周长新，罗厚蔚，丹羽正武.丹参水溶性化学成分的研讨[J].中国药科大学学报，1999，30 (6) : 411-416.

　　[2] 孙金兰，韩伟. 丹参中丹酚酸B的提取别离及剖析办法研讨停顿[J].西医药古代化，2007，9(1)：49-53.

　　[3] 富志军.稀释、精制及枯燥对复方丹参提取液中水溶性成分的影响[J].安徽西医学院学报，2003，22(2)：52-53.

　　[4] 李宁，徐文进，高崇凯.HPLC测定丹酚酸浸透泵片丹酚酸B的含量[J].广东药学院学报，2008，24(5):469-471.