摘要： 本论文样品采集地于湛江近海海域，利用有机溶剂石油醚，三氯甲烷，正丁醇和乙酸乙酯提取海绵中的化学成分，用凝胶色谱（GPC），气相—质谱联用仪（GC/MS），高效液相和液质联用仪等光谱技术进行鉴定，分析海绵含有的化学成分。实验结果表明，此次采摘的海绵中含有多种化合物，并确实了其中Hexanedioic acid bis(2-ethyLhexyL) ester、 n-Hexadecanoic acid、 1,3-CycLopentanedione、2,4-dimethyL-，1,2-DithioLane-3-pentanoic acid Tetradecanoic acid五种化合物，26种化合物的分子量，但还有多种物质还有待进一步分析。
　
　　关键词： 海绵；分离提纯；化学成分

　　0引言
　　海绵中含有丰富的生物活性物质。海绵(Marine sponge) 是属于动物界、海绵动物门(spongia)的一类低等多细胞海洋生物。从海水、海底沉积土到海洋动植物,以及一些热泉涌、水热狭缝等,包罗万象的生态圈,造就了海绵共附生微生物一个复杂多样的群体,同时,产生了独特的有别于陆地微生物的多种具有生物活性的次级代谢产物。本研究利用海南丰富的海绵资源，从中筛选出化合物，通过色谱、光谱分析技术鉴定其结构特征，并分析其生物活性。有望筛选出结构与活性不同于其他海洋来源的化合物，为进一步开发新的海洋药物提供生物资源，具有非常重要的意义。
　　1材料方法
　　1.1 材料样品采集地：湛江近海海域。样品处理：从海水中采摘健康的海绵样品后，分别置于无菌塑料袋中，一般在2h内送回实验室处理，不能及时送回实验室的则放于冰盒内低温短时间保存。
　　1.2 试剂与仪器
　　三氯甲烷分析醇广州化学试剂厂产品
　　正丁醇分析醇广州化学试剂厂产品
　　乙酸乙酯分析醇广州化学试剂厂产品
　　石油醚分析醇天津市福晨化学试剂厂产品
　　10mL移液枪
　　HP6890/5973MSD 气相色谱—质谱联用仪
　　HPLC高效液相仪/氨基酸分析仪（Water 2487 duaLλ absorbance detector）
　　agiLent 1100-esquire hct液质联用仪
　　GPC凝胶渗透色谱仪（分子量测试范围：150—270，000）
　　真空干燥箱DZX—3型（6020B）宁波海曙赛福实验仪器厂
　　1.3 实验方法
　　1.3．1 化合物的提取分离海绵用无菌海水浸洗3遍，然后挤干，以去除表面附着物及夹带的海水微生物。用无菌剪刀进行解剖，用2mL 甘油保存。实验时，用5mL 95%工业酒精浸取3次，每次24小时。提取物冷冻干燥成白色粉末后，将浓缩物分散于5mL水中，再用各2mL，1.5mL，1.5mL石油醚分别提取三次，得可溶物5mL，再用极性逐渐增大的三氯甲烷，正丁醇，乙酸已脂以同样的方法提取三次，各得可溶物5mL，提取余相水溶物5mL。
　　1.3.2 气相—质谱联用仪测定有机相分别取200μL用于气相—质谱连用仪（GC/MS）进行测定分析。色谱条件为： 色谱柱 HP-FFAP（30m×0.25mm, 0.25μm）,60°C ，4°C/min→150°C， 6°C/min，250°C，进样温度 250°C，载气 He，分流比 80：1，柱流量 1.0μm/min；质谱条件为：EI源，电离电压 70ev，离子源温度 230°C，扫描范围 40-500aum，进气量 1μL。
　　1.3.3 高效液相色谱测定有机相冷冻干燥后用于高效液相及液质联用仪进行测定分析。高效液相分析仪条件为：分离系统：WATERS 2695 separations moduLe，色谱柱：Waters C－18（3×15mm），柱温：25±5℃，流动相：甲醇，水梯度洗脱，洗脱条件如表1。
　　检 测 器：Waters 2487 duaL λ absorbance detector，检测波长： 254nm，进样量：6μL，控制系统：Waters empower 软件。供试品溶液配制：正丁醇萃取液中加入800μL甲醇，三氯甲烷提取物、石油醚提取物以及乙酸乙酯提取物中加入1.3mL甲醇，混匀后以12000转的转速离心15min。取上层溶液待分析用。
　　1.3.4 液质联用仪测定液质联用仪分析条件为：仪器型号为agiLent 1100-esquire hct，色谱柱C18，内径4.60*300mm，流动相甲醇+水梯度洗涤，洗脱条件如表2。
　　对水溶物做凝胶色谱分析，GPC的条件为：示差检测器 Waters 1515+2414，两根柱子串联：型号分别是uLtrahydrogeLTM120和uLtrahydrogeLTM500，柱温55℃，检测器温度50℃，流动相：水流速：0.6mL/min。