浅谈急性心肌梗死患者外周血来源(2)
作者:佚名; 更新时间:2014-12-12

  1.3.4 RT-PCR检测 应用Trizol提取上述收集的EPCs总RNA,测定RNA浓度后反转录为cDNA再进行PCR反应。CXCR4引物序列:上游引物5’-AATCTYC CTGCCCACCATCT-3’,下游引物5’-GACGCCAACATAGACCACCT-3’,产物为367 bp。内参照为 GAPDH,上游引物:5’-TATGATGACATCAAGAAGGTGG-3’,下游引物:5’-CACCACCCTGTFGCTGTA,扩增片段213 bp。反应产物用2%琼脂糖凝胶电泳。图像分析软件(Band Leader Application 3.0)分析电泳条带灰度值,目的基因mRNA表达的相对强度=目的基因条带灰度值/内参照条带灰度值。
  1.3.5统计分析采用SAS 8.1 for windows统计软件进行数据处理。计量资料以均数±标准差(χ±s)表示,两组间均数比较用成组t检验,计数资料采用Fisher法进行检验,以P<0.05为差异具有统计学意义。
  
  2 结果
  
  2.1 EPCs的鉴定及计数
  
  培养4 d后可见贴壁的单个核细胞,7 d后单个核细胞变为梭形,内皮样细胞。对贴壁细胞行荧光化学染色后激光共聚焦显微镜下观察,见>80%的细胞双染色阳性,说明这些细胞能内吞ac—LDL和结合UEA-1,可被认为是正在分化的EPCs。随机选择15个视野计数双阳性细胞,见AMI组患者外周血来源EPCs为(439±54)个/mm,明显高于对照组(263±37)个/mm,P<0.01。
  
  2.2 EPCs对SDF-1迁移能力的比较
  
  与对照组相比,AMI组外周血来源EPCs对SDF-1的迁移能力明显增强。[175±19) vs (98±11)个/mm,P<0.01]。
  
  2.3流式细胞仪测定EPCs表面CXCR4的表达
  
  AMI组为(69.5±12.1)%,对照组为(58.7±10.4)%,AMI组较对照组明显增高(P
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