两种X染色质检查方法的比较(2)
作者:佚名; 更新时间:2014-12-12
1.3 计数标准及方法:X染色质位于核膜内缘,是核内惟一浓染的、轮廓清楚的小体,呈小山丘形、扁平形或三角形、圆形等。形态相似但不依附于核膜内缘的不计数,凡核膜缺损、染色过深或细胞上有杂质附着,细胞核重叠等均不做计数;低倍镜下找到细胞集中而又均匀分散的细胞群,油镜下计数100个可计数细胞(可做为计数细胞的是细胞核较大,轮廓清楚完整,无缺损、皱褶,染色清晰。核质呈细网状或均匀的细颗粒状,无深染大颗粒及细菌污染),计算其中X染色质的阳性率。
2 结果
2.1 直接涂片法结果:制片时间短,约40 min,大多数个体细胞被浓染,且背景残留染液杂质较多,污染视野,减少了可计数细胞数量。个体细胞X染色质阳性率为12%~17%。在教学过程中由学生操作时,因主观原因致阳性检出率更低。
2.2 扣染法结果:染色时间较长,95分钟左右,镜下可见细胞轮廓拉清楚,胞核胞浆对比明显,核质均匀,细胞背景材料杂质少,X染色质形态清晰,每个个体X染色质阳性率在17%~20%。
3 讨论
X染色质检查可用于判断细胞中X染色体数目,以此鉴定性别及性染色体异常的遗传性疾病。与核型分析相比具有快速、操作简便,所需仪器简单等优点,是比核型分析优先考虑的方法:直接涂片法染色时间短,制片时间短染色过程不易掌控,细胞不是染色过深,就是细胞核与细胞质对比不明显,可能是由于染液浓度过高或是染色时间不适所造成;且背景残留较多杂质,直接涂片致使细胞不易完全分开,有重叠细胞团,由于固定液挥发还致细胞被破坏较多,导致镜检和统计困难。学生在实验课上操作时,制片过程更不够仔细等主观原因致以上情况更严重,阳性检出率更低,据统计为10%~13%。扣染法增加了细胞解离过程,促进细胞松软,能够使细胞充分松散,不重叠;在高倍镜下观察,核质均匀,细胞质与细胞核区分明显,易于统计;固定过程在离心管中进行,减少了固定液挥发而导致的细胞破坏,信捷职称论文写作发表网,细胞保持完整,染色时间易于控制,该法还减少染液杂质残留于核内及周围。
参考文献:
[1] 樊祥岩,杨廷忠.医学遗传学基础[M].江苏:江苏科学技术出版社,1999.77.
[2] 王静颍,王 懿.医学遗传学基础[M].北京:科学出版社,2007.97.
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