【关键词】 条件位置偏爱；海马；电解损毁；吗啡依赖；药物渴求
【Abstract】 AIM: To investigate whether the ventral subiculum (VSUB) lesions can release the drug craving from drug addicted rats. METHODS: Female SD rats were trained to acquire the morphine conditioned place preference (CPP). After the preference was established, the rats were divided to 3 groups. The lesion group (n=20) received the electrolytic lesions of VSUB, the sham lesion group (n=10) received the same operation to the lesion group but no current passed, and the control group (n=10) received no operation. After 5 d recovery, the 3 groups underwent the CPP testing again to observe the extent of drug craving. RESULTS: A histological test was performed on postlesion rats after a behavioral test, and the lesions were found confined to the VSUB. The time that the lesion group spent in the drugpaired side was significant decreased ［(93.1±26.0) s］ compared with both sham group ［(10.1±4.5) s］ and control group ［(5.1±4.1) s］. (P<0.05). CONCLUSION: The VSUB play an important role in drug addiction and lesions of the exact part can release the drug craving from drug addicted rats.
【Keywords】 conditioned place preference(CPP); hippocampus; electrolytic lesions; morphine dependence; drug craving
【摘要】 目的： 研究损毁腹侧海马下托（VSUB）是否能够阻止成瘾大鼠的条件位置偏爱. 方法： 雌性SD大鼠，经过吗啡强化训练使其形成条件位置偏爱（CPP）. CPP形成并稳定之后，将大鼠分成3组： 损毁组20只，接受双侧VSUB的直流电损毁；假手术组10只，接受与手术组相同的手术操作，但不通电流；空白对照组10只，不作任何处理. 经过5 d的恢复，3组大鼠再次测定CPP 时间，确定其药物渴求的程度. 结果： 行为学测试结束后，将样本灌注切片进行组织学评定，损毁组脑片组织缺损位置局限于VSUB区域. 损毁组大鼠伴药箱停留时间明显减少［(93.1±26.0) s］，相对于假手术组［(10.1±4.5) s］和空白对照组［(5.1±4.1) s］的大鼠在伴药侧停留的时间减少量有显著性差异（P<0.05）.结论： VSUB在大鼠对药物的渴求中起着非常重要的作用，损毁该部位可以阻止成瘾大鼠的条件位置偏爱.
【关键词】 条件位置偏爱；海马；电解损毁；吗啡依赖；药物渴求
0引言
药物依赖是一种伴有心理的和神经生物学表现的慢性大脑功能紊乱. 大多数吸毒的患者都会在戒毒治疗（消除了身体依赖症状）一段时间后由于心理依赖的驱使而复吸. 大鼠与人有着相似的复吸机制，主要有药物引燃、心理应激、伴随药物的条件刺激（例如熟悉的环境和人等）. Vorel等［1］在实验中以Theta 波刺激海马腹侧下托（ventral subiculum, VSUB）可以诱发大鼠的药物渴求，这一发现提示了VSUB在复吸发生中具有重要作用. 本实验采用条件位置偏爱（conditioned place preference, CPP）时间作为衡量大鼠将药物作用与环境相联系的指标［2-3］，通过对比VSUB损毁前后大鼠偏爱时间的变化，探讨VSUB在吗啡依赖形成过程中的作用.
1材料和方法
1.1材料成年雌性SD大鼠40只， 体质量220～250 g（由第四军医大学试验动物中心提供）；大鼠立体定向手术固定头架（日本成茂公司SR5）；有恒流输出的刺激器、隔离器、损毁电极（不锈钢材质，直径0.2 mm，涂覆绝缘漆，尖端裸露0.5 mm）、吗啡粉剂（青海制药厂生产，使用前以蒸馏水溶解配制成1 g/L的溶液）. 按文献［4］的方法，大鼠的位置偏爱箱包括A, B, C三个独立的箱体， 各箱体内地板材质及墙壁颜色图案均不相同. 两个箱中均装有自动计时装置，当动物进入其中时，连接在箱外的计时器开始计时，累加动物在其中所处的时间，同时计数器会增加一个数值，累加动物进入的次数，避免人为计时计数的误差.
1.2方法
1.2.1地点偏爱的建立大鼠实验前先单独饲养于笼中，光照时间从上午8时至晚8时模拟正常昼夜交替（12 h/12 h）. 每日进行4次适应性抓握，两日后正式开始训练.
训练分① 前测试阶段： 测试大鼠的自然偏爱，将有天然偏爱的大鼠从样本中剔除. 测试时升起通道隔板，使三箱连通，大鼠从B箱放入，开启自动计时装置，记录15 min内大鼠在A, C两箱内分别停留的时间以及穿越次数. 测试期间，保证箱内光线、气味的一致以及周围环境的安静. 测试结果记录成表. 根据此阶段的测试结果，选择两侧偏爱时间相差<100 s的大鼠进入下一阶段. ② 训练阶段： 用隔板封闭两箱间通道. 每只大鼠于上午9时和晚8时各进行1次皮下注射. 其中1次注射吗啡（10 mg/kg），另1次注射生理盐水0.3 mL. 注射吗啡后大鼠放入A箱，注射生理盐水后大鼠放入C箱，均在箱中停留40 min. 重复训练7 d. ③ 测试阶段，操作与第①阶段所述相同，白箱时间增加值>100 s则认为动物产生了明显的偏爱，低于此值者不入选样本. 穿越次数低于20次的动物，说明运动不活跃，CPP测量值误差较大，该动物剔除出样本.
1.2.2动物分组将已经建立地点偏爱的大鼠完全随机分配至三个试验组. 损毁组（20只）；假手术组（10只），只将电极插入，不做损毁；空白对照组（10只），不做任何处理，笼养5 d.
1.2.3阳极损毁大鼠10 g/L戊巴比妥钠腹内注射（50 mg/kg），麻醉后固定于立体定向仪上，门齿杆位于耳间线下方3.3 mm，双侧VSUB颅骨表面投影点钻孔，将损毁电极依照大鼠脑立体定位图谱下至靶点，双侧坐标以Bregma为原点， AP -6.3 mm, ML ±5.2 mm, DV -7.2 mm［5］，通直流电进行损毁，信捷职称论文写作发表网，电极接直流电源阳极，电流（1 mA），通电时间30 s，完成后取出电极，缝合. 全部手术均保证无菌操作，防止动物发生感染. 动物术后恢复5 d，之后进行行为测试.
1.2.4术后地点偏爱测试与前述的地点偏爱测试方法相同，分别测试每只大鼠在A, C两箱的停留时间，记录成表.
1.2.5组织学检查测试完成后，损毁组及假手术组大鼠在戊巴比妥钠深度麻醉下以生理盐水，10 g/L多聚甲醛混合10 g/L亚铁氰化钾，40 g/L多聚甲醛PBS溶液的顺序依次灌注，取脑，做冰冻切片（冠状，片厚60 μm），尼氏染色观察损伤范围.
统计学处理： CPP测量结果以训练前后以及手术前后的白箱时间改变值作为统计量，数据处理使用SPSS10.5软件，采用配对t检验及单因素方差分析(Oneway ANOVA)，显著性水平取α＝0.05.
2结果
2.1组织学评定采用双盲法，由第三人在显微镜下观察神经缺损范围，将损毁位置不准确或损毁区域过大过小的个体从样本中去除. 损毁位置组织学观察： 损毁组损毁范围较准确的局限于双侧VSUB区域内，损毁区内神经元及周围组织包括路过的纤维均已变性坏死，形成空洞，空洞周围组织镜下未见异常. 这样的损伤在以Bregma为原点，AP 5.80 mm～7.02 mm范围内均能被观察到. 假手术组仅见针道附近轻微损伤，VSUB区域除针道外并无明显改变（图1）.
图1腹侧海马下托损毁范围组织学检查
2.2CPP测试大鼠在7 d的训练完成后，测定一次术前偏爱，各组大鼠在白箱停留时间增加值为(169.0±23.2) s，经检验，P<0.001，说明CPP已经形成. 在手术损毁VSUB后，CPP时间较术前有明显改变. 损毁组白箱停留时间减少值为(93.1±26.0) s, 而假手术组的伴药侧停留时间减少值为(10.1±4.5) s，空白对照组伴药侧停留时间减少值为(5.1±4.1) s. 经单因素方差分析，各组间有显著差异，F=7.877，P=0.001. 以LSDt检验再
