【关键词】针刺治疗；抑郁症；疾病模型；大鼠；行为学；5-HT；NE
Effects of acupuncture on serotonin and norepinephrine in hippocampus of depressed model rats
【Abstract】Objective To observe how acupuncture affects the mechanism of depression model rats.Methods Using Open-Field method to randomly select 40 adult SD male rats into normal control, model group, drug treatment and acupuncture treatment group, 10 rats per group. Separation, long term unpredictability, medium stimulation techniques were applied to modify rats? behavior. Then using Open-Field method to reflect changes in depressed model rats? behavior between groups treated with acupuncture and control. And the concentration of monoamine neurotransmitters and their metabolites in hippocampus of rat brain were determined by HPLC-ECD. Results Compared with normal control, acupuncture treatment group’s behavior was not different （P＞0.05）on the 7th day after treatment. On the 21th day after treatment, acupuncture treatment group’s behavior was not different （P＞0.05）with drug treatment group, and was more different with model group（P＜0.01）. Compared with normal group on the 21th day of treatment, the concentration of serotonin and norepinephrine in hippocampus of acupuncture treatment group was not different （P＞0.05）, whereas was more different with model group （P＜0.05，P＜0.01）.Conclusion This experiment proved that acupuncture treatment could change the behavior abnormality of depressive model rats. The curative effects is comparable to flouxetine. The changes of the concentration of serotonin and norepinephrine in hippocampus are one of the mechanism.
【Key words】acupuncture treatment；depression；disease model；rat；behavior；5 hydroxytryptamine (5-HT);NE
自1984年，针灸开始介入抑郁症的治疗以来，取得了确切的临床疗效，但是对于针刺作用的过程和机制研究尚不深入。为了探讨针刺在抑郁症治疗中的应用规律，我们观察了针刺对抑郁症模型大鼠海马区内单胺类神经递质的影响，并与氟西汀（选择性5-羟色胺再摄取抑制剂）作对照。现将研究结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 动物与分组
成年SD大鼠，体重180～220g，雄性，南京中医药大学动物中心提供。首先用Open-Field法作行为学评分，选择得分相近的40只大鼠进行实验分组。将大鼠随机分为正常组、模型组、药物组、针刺组，共4组，每组10只；正常组每笼饲养5只，模型组及针刺组每笼饲养1只（分养）。
1.2 实验方法
1.2.1 复制模型
参考文献［1］复制抑郁症模型：模型组、药物组、针刺组大鼠，共接受21天各种不同的应激，包括冰水游泳（4℃，5min）、热应激（45℃，5min）、禁水（24h）、夹尾（1min）、电击足底（电压50mV，每隔15s刺激1次，每次持续10s，共15次）、摇晃（1次/s，5min）、禁食（24h）和昼夜颠倒等刺激，平均每种刺激各4次。正常组，常规饲养，不接受任何应激性刺激。
于实验第1、21天测定各大鼠行为学（水平运动和垂直运动）。
1.2.2 治疗方法（实验第21天，进入治疗阶段）
正常组，继续常规饲养，每笼饲养5只。模型组，继续分养，每笼饲养1只；常规饲料喂养，不予应激性刺激，也不予任何治疗措施。药物组，继续分养，每笼饲养1只；常规饲料喂养，不与应激性刺激，按照1.8mg/kg给予氟西汀，将药物溶解于生理盐水中灌胃。1日1次治疗，连续21天。针刺组，根据《实验针灸学》［2］大鼠穴位定位方法，选择百会、内关、三阴交，并参照人和动物的穴位解剖结构特点，在华兴邦研制的大鼠针灸穴位图谱基础上，在大鼠前正中线上，额顶骨缝交界线前方处定位神庭穴。针刺方法：常规穴位消毒，选用苏州医疗用品厂生产的“华佗”牌32号1.0寸针灸针进行治疗。百会穴向前斜刺，神庭穴向上斜刺，进针深度约为2mm，内关直刺1mm，三阴交直刺5mm，每穴行均匀捻转刺激30s，留针10min。1日1次治疗，连续21天。
分别于实验第28、35、42天测定各鼠行为学的变化。
1.3 行为学测定
Open-Field法［3］测定大鼠行为学。本实验所用敞箱为正方形，长、宽各80cm，高40cm，底面由面积相等，边长16cm的正方形25块组成，白色内面，以动物穿越底面的块数为水平活动（crossing）得分，以直立次数为垂直活动（rearing）得分，每次3min。
1.4 高效液相-电化学（HPLC-EC）技术与单胺类神经递质的检测
1.4.1 试剂
去甲肾上腺素酒石酸盐（NE）、5-羟色胺盐酸盐（5-HT）、3-甲氧基-4-羟基苯乙二醇（MHPG）、5-羟吲哚乙酸（5-HIAA）（以上为SIGMA公司产品），乙二胺－四乙酸二钠（EDTA）（分析纯，汕头金砂化工厂，批号：010304）、辛烷基磺酸钠（东京化成工业株式会社，批号：A87509A）、无水乙酸钠（分析纯，南京化学试剂厂，批号：971142）、柠檬酸（分析纯，上海荣润化工有限公司，批号：20010630）、二正丁胺（化学纯，中国常州市光明生物化学研究所，批号：960308）、高氯酸（分析纯，上海桃浦化工厂，批号：0710）、甲醇（一级品，高效液相色谱专用，江苏淮阴塑料制品厂精细化工研究所，批号：980512），实验用水为重蒸馏水。
1.4.2 仪器
高效液相色谱仪由岛津LC-10A系列组成，LC-10AD泵，SIL-10A自动进样器，进针深度35mm,样品注射速度5μl/s，CTO-10AVP柱温箱，温度18℃，压力为160Kgf/cm2。L-ECD-6A电化学检测器，CLASS-LC10 VER 1.63工作站。色谱柱为Lichrospher C18, 4.6mm×250mm，江苏汉邦科技有限公司生产。
1.4.3 流动相的配备［4］
流动相为乙酸钠(100mmol/L)－柠檬酸(85mmol/L)缓冲液，pH 3.7，内含0.4mmol/L二正丁胺，1.09mmol/L辛烷磺酸钠，0.2mmol/L EDTA，及18%甲醇，真空抽滤，超声脱气15min后使用。流速为0.5ml/min。
1.4.4 样品制备及测定
实验第42天（治疗21天）后，断头处死大鼠，快速取大脑组织，并置于冰皿上，按Glowinski法分离下丘脑［5］，称重后加入0℃～4℃高氯酸提取液330μl（含0.01%半胱氨酸和0.
