统计学处理： 采用SPSS 12.0统计软件对结果进行统计学分析，数据均采用x±s表示，采用方差分析进行比较，P<0.05为差异有统计学意义. 多组均数间的多重比较采用LSD法.

    2结果

    2.1肝脏病理学变化对照组无明显组织学异常. 1组： HE和VG染色示小鼠血吸虫病肝纤维化模型建立成功. 血吸虫感染后8 wk，虫卵肉芽肿大小和数量达到高峰，大量炎性细胞浸润；随感染时间延长，肉芽肿逐渐缩小，肝细胞变性、坏死和炎性细胞浸润明显减轻，胶原纤维逐渐增多. 至20 wk，胶原纤维由最初的细线状变为条索状或网状分布在汇管区、虫卵肉芽肿周围并延伸至肝小叶间(图1A，B). Vit E组肉芽肿大小与1组比较无显著差异(P>0.05)，对肝细胞变性、坏死和炎性细胞浸润程度影响不明显；2，3组虽有不同程度肝纤维化，但纤维带变细、窄、短，胶原纤维局限于汇管区和肉芽肿内及周围，肝小叶间很少有胶原沉积(图1C)，与1组比较，肝纤维化程度分级差异有显著性(P<0.05). 4组与1组比较无明显差异(表1).

    2.2肝脏MDA含量和SOD活性与对照组比较，1组SOD活性下降(P<0.05)，MDA含量增多(P<0.05)，有统计学意义. 2, 3组SOD活性与1组比较升高(P<0.05)，但与对照组比较仍相差甚远(P<0.05)；2, 3组MDA含量与1组比较减少(P<0.05)，2组与对照组比较无显著性差异(P>0.05)；4组与1组比较无明显差异(表1).

    A: 模型组×100; B: 模型组×200; C: Vit E组×100.

    图1肝脏胶原纤维分布VG

    2.3肝脏αSMA表达对照组肝脏血管壁、胆管壁平滑肌有少许αSMA阳性表达，汇管区及肝窦内基本无αSMA阳性表达；1组汇管区、虫卵肉芽肿内及周围胶原纤维沉积处可见大量索状αSMA阳性表达细胞，肝窦内可见多量αSMA阳性表达细胞(图2A, B)；2, 3组αSMA阳性细胞数目减少(P<0.05)，局限在汇管区、纤细的纤维隔及肉芽肿内及周围，肝窦内表达减少(图2C)；4组与1组比较无明显差异(表1).

    A: 模型组×100; B: 模型组×200; C: Vit E组×100.表1Vit E对虫卵肉芽肿直径、MAD含量、SOD活性、αSMA平均吸光度值及肝纤维程度的影响

    2.4肝脏α1(I)型前胶原基因表达和胶原含量1组(即感染20 wk末)α1(I)型前胶原mRNA和胶原含量高于感染12 wk时(P<0.05和P<0.05)和对照组(P<0.05和P<0.05). 2, 3组α1(I)型前胶原mRNA和胶原含量与1组比较差异有显著性(P<0.05和P<0.05)；2组α1(I)型前胶原mRNA和胶原含量与感染12 wk时比较有显著性差异(P<0.05和P<0.05)，而3组无统计学意义(P>0.05)；4组与1组比较无明显差异(图3，表2).

    M: marker; 1: 模型组; 2: 感染12 wk; 3:  Vit E高剂量组;  4: Vit E中剂量组; 5: Vit E低剂量组.

    图3RTPCR分析各组α1(I)型前胶原mRNA表达表2Vit E对胶原含量和α1(I)型前胶原基因表达的影响

    3讨论

    氧化应激是多种病因所致肝纤维化发生发展的重要环节之一［2］. Vit E作为体内一个重要的抗氧化剂，有抗肝纤维化［3-5］、抗肿瘤、抗衰老等功能. 宗道明等［5］研究表明，Vit E可降低血吸虫病肝纤维化患者血清肝纤维化各项指标，对肝纤维化组织形态学的好转有积极作用，治疗血吸虫病肝纤维化疗效显著. 但目前有关Vit E抗血吸虫病肝纤维化机制少见文献报道.

    Chojkier等［6］研究表明，Vit E抑制HSC α1(I)型胶原基因表达. 我们发现，Vit E降低肝脏α1(I)型前胶原基因表达、胶原含量及肝纤维化程度分级；2组α1(I)型前胶原mRNA和胶原含量显著低于感染12wk时. 可见Vit E可延缓血吸虫病肝纤维化进程，减轻肝纤维化程度. 本研究中，1组MDA含量增加，SOD活性下降，说明日本血吸虫病肝纤维化之肝脏发生氧化应激反应，产生脂质过氧化损伤，与文献［1］报道一致，而Vit E能够不同程度地逆转这些改变，对此具有一定的治疗作用；并且Vit E抑制HSC活化和增殖. Vit E可能通过抑制肝脏脂质过氧化作用和由此产生的活性醛，如MDA 和4羟化壬烯(4HNE)，从而抑制MDA和4HNE蛋白加合物形成，该加合物是实验性肝损伤和肝纤维化联系的枢纽［7］，进而抑制氧化应激诱导的HSC α1(I)型前型胶原基因表达和蛋白合成［8］. 我们发现Vit E尚不能完全逆转SOD活性，故对其剂量、疗程以及与其它药物的联合应用有待于进一步的研究.

    总之，Vit E可延缓血吸虫病肝纤维化进程，减轻肝纤维化程度，其机制与抗脂质过氧化作用、抑制HSC活化和增殖、降低α1(I)型前胶原基因表达和胶原合成有关，适当补充Vit E进行抗纤维化治疗是一种可行的手段，有望成为一种廉价、不良反应少、疗效显著的临床用药.

    【参考文献】

    ［1］   ElSokkary GH, Omar HM, Hassanein AFMM, et al. Melatonin reduces oxidative damage and increases survival of mice infected with Schistosoma mansoni［J］. Free Radic Biol Med, 2002,32(4):319-332.

    ［2］   Parola M, Robino G. Oxidative stressrelated molecules and liver fibrosis［J］. J Heptol, 2001,35(2):297-306.

    ［3］   Houglum K, Venkataramani A, Lyche K, et al. A pilot study of the effects of dalphatocopherol on hepatic stellate cell activation in chronic hepatitis C［J］. Gastroenterology, 1997,113(4):1069-1073.

    ［4］   孙军，丁虹，沈志祥. 维生素E对小鼠慢性乙醇性肝损害的保护作用［J］. 胃肠病学和肝病学杂志，2001,10(1):47-49.

    ［5］   宗道明，冯韵琴，赵晓贡. 维生素E治疗血吸虫病肝纤维化的临床研究［J］. 中国寄生虫防治杂志,2005,18(3):212-213.

    ［6］   Chojkier M, Houglum K, Lee KS, et al. Long and shortterm Dαtocopherol supplementation inhibits liver collagen α1(Ⅰ) gene expression［J］. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol, 1998,275(6):G1480G1485.

    ［7］   Bedossa P, Houglum K, Trautwein C, et al. Stimulation of collagen α1(Ⅰ) gene expression is associated with lipid peroxidation in hepatocellular injury: A link to tissue fibrosis? ［J］. Hepatology, 1994,19(5):1262-1271.

    ［8］   Casini A, Ceni E, Salzano R, et al. Neutrophilderived superoxide anion induces lipid peroxidation and stimulate collagen synthesis in human hepatic Stellate cells: Role of nitric oxide［J］. Hepatology, 1997,25(2):361-367